【摘 要】
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目的 通过原核表达人重链铁蛋白基因(recombinant human H-chain ferritin,rHF),为新型纳米疫苗的研制提供新方法和手段. 方法 将人源性铁蛋白氨基酸序列按照大肠杆菌常用密
【机 构】
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扬州大学兽医学院,江苏扬州225100;军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
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目的 通过原核表达人重链铁蛋白基因(recombinant human H-chain ferritin,rHF),为新型纳米疫苗的研制提供新方法和手段. 方法 将人源性铁蛋白氨基酸序列按照大肠杆菌常用密码子进行优化,合成重组人重链铁蛋白(rHF)基因并克隆至原核表达载体pET-32a.通过双酶切、测序鉴定阳性重组质粒,将阳性质粒转入感受态细胞BL21(DE3),再经过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.通过镍柱纯化重组蛋白. 结果 成功构建并表达纯化重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白产物,利用电子透射显微镜观察重组蛋白构型.重组铁蛋白以可溶性形式存在于蛋白上清,并具有生物学活性.且能够胞外自组装成具有12-20 nm狭窄尺寸分布的纳米笼结构. 结论 采用大肠埃希菌表达系统可表达可溶性rHF蛋白并具有纳米粒结构,为新型纳米疫苗的研制以及疾病诊治提供了理论基础.
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