【摘 要】
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目的 优化虾过敏原蛋白质谱分析试验的胰蛋白酶酶解条件,提高质谱对虾过敏原蛋白的分析能力.方法 采用响应面试验设计对虾过敏原蛋白酶酶解的pH值、温度和时间进行优化,用胰蛋白酶消化肽段,经色谱分离后采用四极杆静电场轨道离子阱高分辨质谱测定,利用UniProt蛋白数据库和MaxQuant软件对过敏原蛋白进行鉴定和定量分析.结果 获得虾中2种过敏原蛋白,分别为原肌球蛋白和精氨酸激酶,质谱强度为100.2×106～436.5×106.响应面分析结果显示,酶解时间为4.29 h、温度为44.15℃、溶液pH值为6.5
【机 构】
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浙江省疾病预防控制中心理化毒理所,浙江杭州310051
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目的 优化虾过敏原蛋白质谱分析试验的胰蛋白酶酶解条件,提高质谱对虾过敏原蛋白的分析能力.方法 采用响应面试验设计对虾过敏原蛋白酶酶解的pH值、温度和时间进行优化,用胰蛋白酶消化肽段,经色谱分离后采用四极杆静电场轨道离子阱高分辨质谱测定,利用UniProt蛋白数据库和MaxQuant软件对过敏原蛋白进行鉴定和定量分析.结果 获得虾中2种过敏原蛋白,分别为原肌球蛋白和精氨酸激酶,质谱强度为100.2×106～436.5×106.响应面分析结果显示,酶解时间为4.29 h、温度为44.15℃、溶液pH值为6.55时,过敏原蛋白的质谱响应强度最高,为457.48×106.采用溶液pH值6.5、温度44℃、时间4.2 h进行验证试验,获得过敏原蛋白的平均响应强度为448.1×106,与预测值偏差为2.1％.结论 采用响应面法可以优化蛋白酶酶解条件,当pH值为6.5、温度为44 ℃、时间为4.2 h时具有最佳的酶解能力.
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