人胚胰岛冷冻保存的实验研究

来源 :哈尔滨医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hz9466894
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移植物来源紧张的问题长期以来困扰着胰岛细胞移植的发展,对胰岛细胞进行冷冻保存建立细胞库不但可以解决这一问题而且易于控制移植物的质和量,为临床移植提供充足的资源和选择性[1]。本实验对传统冷冻方法[2]进行改良,通过优化的六段降温程序冻存人胚胰岛细胞,开创性地将玻璃化超快速降温冷冻法应用于对人胚胰岛细胞的冻存。复温后的人胚胰岛在形态及分泌功能上与冷冻前无显著性差别,冷冻效果优良。1 材料与方法  胎龄18~28周之间的中期水囊引产死胎,胎儿死亡时间不超过4h;胎儿无畸形及传染病(由哈尔滨市各大医院妇产科提供)。冷冻保存方法为:①微机程控降温法:胰岛移入冻存液中,于4℃冰箱平衡30min后移入预先设定好降温程序的微机程控降温仪冷冻室内,进入慢速降温程序。程序运行结束后,迅速将冻存管投入液氮保存。②玻璃化降温法:胰岛分别在50%、75%、85%、95%的玻璃化冻存液中冷平衡8~10min后转入100%玻璃化冻存液中冷平衡20min,迅速投入液氮中保存。③复温:取出冻存管,迅速投入37℃恒温水浴箱中摇动2min即可完全融化。  冻存效果的判定:①冻存前后在倒置相差显微镜下对培养中的活细胞进行形态学观察。②冻存前后对胰岛细胞进行透射电镜观察。③全自动生化分析仪测定冻存前后细胞培养液中胰岛素水平,并作胰岛素释放试验。所得数值作配对计量资料的t检验,以判断不同冷冻方法冷冻效果间的差异。
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