探讨三黄生肤油对糖尿病大鼠末梢循环障碍和足溃疡的作用及相关机制。
方法(1)取25只Wistar大鼠按照随机数字表法分为非糖尿病组、糖尿病假治疗组、二甲双胍组、三黄生肤油组、联合治疗组，每组5只。非糖尿病组注射柠檬酸钠缓冲液，其余4组大鼠注射10 mg/mL链脲佐菌素诱导建立糖尿病模型。注射后3周，5组大鼠均行足部低温处理制备末梢循环障碍模型。注射后第9～12周，非糖尿病组和糖尿病假治疗组大鼠均以生理盐水灌胃，双后足底涂抹麻油；二甲双胍组大鼠以稀释的二甲双胍灌胃，双后足底涂抹麻油；三黄生肤油组大鼠以生理盐水灌胃，双后足底涂抹三黄生肤油；联合治疗组大鼠以稀释的二甲双胍灌胃，双后足底涂抹三黄生肤油。注射后第9周治疗前(以下称治疗前)及治疗1、2、3周，采用红外测温仪及足底测试仪分别测定大鼠双后足底温度和热痛阈值。(2)另取25只大鼠同前分组并建立糖尿病模型(非糖尿病组除外)，注射后第9周再行左后足底水蒸气烫伤制备足溃疡模型，并给予相应药物治疗。治疗3、7、21、35 d，观察创面大体情况及面积变化。治疗35 d处死大鼠，取创面组织行HE染色观察组织形态学及免疫组织化学染色检测环氧化酶2(COX-2)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析、Bonferroni事后检验。
结果(1)糖尿病末梢循环障碍实验。除治疗2周时联合治疗组及治疗3周时二甲双胍组、三黄生肤油组、联合治疗组(t值为0.258～2.647，P值均大于0.05)，各时相点4组糖尿病大鼠足底温度均明显低于非糖尿病组(t值为2.811～6.066，P值均小于0.05)。除治疗2、3周联合治疗组大鼠足底温度明显高于糖尿病假治疗组(t值分别为3.419和2.863，P值均小于0.05)，各时相点二甲双胍组、三黄生肤油组、联合治疗组大鼠足底温度与糖尿病假治疗组相近(t值为0.128～1.654，P值均大于0.05)。治疗前4组糖尿病大鼠及治疗1周时三黄生肤油组大鼠足底热痛阈值明显高于非糖尿病组(t值为2.836～4.456，P值均小于0.05)，各时相点二甲双胍组、三黄生肤油组、联合治疗组大鼠足底热痛阈值与糖尿病假治疗组相近(t值为0.312～1.611，P值均大于0.05)。(2)糖尿病足溃疡实验。治疗3 d，各组大鼠创面均水肿。治疗7 d，各组大鼠创面继续扩大，红肿明显并结痂。治疗21 d，非糖尿病组、三黄生肤油组、联合治疗组大鼠创面结痂基本脱落；糖尿病假治疗组大鼠创面皮肤依然肿胀；二甲双胍组大鼠创面结痂尚未脱落，创缘皮肤暗红。治疗35 d，非糖尿病组、三黄生肤油组、联合治疗组大鼠创面基本愈合；糖尿病假治疗组、二甲双胍组大鼠创面依然肿胀，创面结痂尚未完全脱落。治疗3、7 d，4组糖尿病大鼠创面面积与非糖尿病组相近(t值为0.111～1.476，P值均大于0.05)。治疗21 d，糖尿病假治疗组大鼠创面面积明显大于非糖尿病组(t＝5.502，P<0.01)，其余3组糖尿病大鼠创面面积与非糖尿病组相近(t值为0.544～1.676，P值均大于0.05)；二甲双胍组大鼠创面面积与糖尿病假治疗组相近(t＝1.895，P>0.05)，三黄生肤油组、联合治疗组大鼠创面面积明显小于糖尿病假治疗组(t值分别为5.809、3.426，P<0.05或P<0.01)。治疗35 d，糖尿病假治疗组和二甲双胍组大鼠创面面积明显大于非糖尿病组(t值分别为8.495、4.108，P值均小于0.01)，三黄生肤油组和联合治疗组大鼠创面面积与非糖尿病组相近(t值分别为0.291、2.195，P值均大于0.05)；二甲双胍组大鼠创面面积与糖尿病假治疗组相近(t＝0.897，P>0.05)，三黄生肤油组和联合治疗组大鼠创面面积明显小于糖尿病假治疗组(t值分别为6.923、6.583，P值均小于0.01)。治疗35 d，与糖尿病假治疗组和二甲双胍组相比，非糖尿病组、三黄生肤油组、联合治疗组大鼠创面皮肤结构较为完整，真皮层炎性细胞浸润较少，创缘处胶原纤维排列较整齐。治疗35 d，与糖尿病假治疗组[COX-2表达为(222±89)%，VEGF表达为(55±12)%]比较，二甲双胍组大鼠创面COX-2、VEGF表达[分别为(137±24)%、(94±36)%]无明显差异(t值分别为3.046、2.653，P值均大于0.05)；非糖尿病组、三黄生肤油组及联合治疗组大鼠创面COX-2表达[分别为(100±35)%、(91±42)%、(109±17)%]明显下调(t值为4.039～4.653，P值均小于0.01)，VEGF表达[分别为(100±28)%、(143±12)%、(120±13)%]明显上调(t值为3.363～5.905，P<0.05或P<0.01)。
结论三黄生肤油可改善糖尿病末梢循环障碍引起的大鼠足部皮温降低及痛觉迟钝；且可通过下调创面组织中COX-2表达、上调创面组织中VEGF表达，促进大鼠糖尿病足溃疡的愈合。