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【目的】1、探讨人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266的Notch信号通路激活情况;2、探索Notch信号通路抑制剂DAPT对RPMI8226细胞和U266细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,及其对Notch分子的作用;3、探讨RPMI8226细胞和U266细胞中Notch分子对NF-κB信号通路的影响,进一步认识多发性骨髓瘤细胞中Notch分子和NF-κB信号通路之间的相互关系。【方法】1、以正常人外周血单个核细胞(PBMC)为阴性对照,T-ALL细胞株Jurkat细胞为阳性对照,采用Western blot方法检测人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞和U266细胞内Notch1 transmembrane subunit(NTM)蛋白表达水平,q RT-PCR方法检测Notch1下游靶分子Hes1的转录水平;2、以10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L、70μmol/L和20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L浓度的DAPT分别作用RPMI8226和U266细胞后,采用CCK-8法检测RPMI8226和U266细胞增殖情况并计算作用48h后两株细胞增殖达50%抑制率时的DAPT浓度,即IC50;3、以适当浓度的DAPT作用48h后,采用流式细胞术分别检测RPMI8226和U266细胞周期及凋亡情况;4、以适当浓度的DAPT作用48h后,采用q RT-PCR方法检测RPMI8226和U266细胞内Notch信号通路相关分子Notch1、Hes1、c-Myc以及NF-κB信号通路相关分子p65、p50、IκBα、IKKβm RNA水平变化,同时采用Western blot检测NTM、c-Myc、p-IκBα、p-IKKβ蛋白水平变化,p65、p50在胞浆和胞核的蛋白水平变化。【结果】1、Western blot结果显示,正常人外周血单个核细胞未检测到NTM蛋白的表达,而人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞和U266细胞均可检测到较高水平的NTM蛋白,且在RPMI8226细胞中高于阳性对照Jurkat细胞,而在U266细胞中低于阳性对照;q RT-PCR结果提示,RPMI8226细胞内Hes1 m RNA水平高于阳性对照Jurkat细胞,而U266细胞低于阳性对照,但均较PMBC表达高(p<0.01);2、不同浓度DAPT对RPMI8226细胞和U266细胞的增殖均有较强的抑制作用,且这种作用呈一定的浓度和时间依赖性。其中DAPT作用RPMI8226细胞48h的IC50为42.15μmol/L,而作用U266细胞48h的IC50为65.82μmol/L;3、以40μmol/L 浓度的DAPT作用RPMI8226细胞48h后,细胞凋亡率达38.0±4.2%,明显高于对照组的3.2±1.6%(p<0.01);以65μmol/L浓度的DAPT作用U266细胞48h后,细胞凋亡率为12±3.2%,高于对照组的3.1±1.2%(p<0.01);4、以40μmol/L浓度的DAPT作用RPMI8226细胞48h后,G0/G1期细胞无明显变化,S期细胞比率为63.25±2.43%,明显高于对照组的47.64±1.58%,而G2/M期细胞比率为3.58±1.10%,明显低于对照组的14.48±2.41%减少(p<0.01),提示DAPT可使RPMI8226细胞周期阻滞于S期;以65μmol/L浓度的DAPT作用U266细胞48h后,G0/G1期细胞比率为43.74±1.45%,高于对照组的32.61±1.29%,S期细胞比率为46.04±1.04%,低于对照组的57.64±1.64%(p<0.01),G2/M期细胞比率无明显变化,提示DAPT可使U266细胞周期阻滞于G0/G1期;5、以40μmol/L和65μmol/L浓度的DAPT分别作用RPMI8226和U266细胞48h后,q RT-PCR结果提示,与对照组相比,Notch1、Hes1、c-Myc m RNA水平降低(p<0.01)。NF-κB信号通路中p50、p65 m RNA水平降低(p<0.01),其正调控因子IKKβm RNA水平降低(p<0.01),而负调控因子IκBαm RNA水平在RPMI8226细胞中升高(p<0.01),而在U266细胞中降低(p<0.01);6、DAPT作用48h后,Western blot结果显示,RPMI8226细胞和U266细胞中NTM和c-Myc蛋白表达降低;7、DAPT作用48h后,Western blot结果显示,RPMI8226细胞和U266细胞中NF-κB信号通路正调控因子p-IKKβ蛋白表达降低,而负调控因子p-IκBα蛋白表达增高,且胞核内的p50和p65蛋白表达水平降低,而胞浆内p50和p65蛋白表达水平增高。【结论】1、人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266均表达较高水平的Notch1跨膜蛋白NTM蛋白和下游靶基因Hes1 m RNA;2、Notch信号通路特异性抑制剂DAPT可抑制多发性骨髓瘤细胞增殖并诱导其凋亡且对细胞增殖有一定程度的周期阻滞;3、DAPT可能是通过下调Notch信号通路下游靶基因Hes1及癌基因c-Myc的表达抑制人多发性骨髓瘤细胞增殖;4、DAPT抑制人多发性骨髓瘤细胞增殖的另一个可能机制是其抑制NF-κB信号通路经典活化途径中关键分子的表达。