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目的:本研究试图利用前期工作中诱导建立的小细胞肺癌多药耐药细胞系构建小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达消减cDNA文库,为进一步功能研究奠定基础.
方法:(1)以小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDPcDNA为实验方(Tester),小细胞肺癌细胞H446cDNA为对照方(Driver),应用抑制消减杂交(SSH)技术结合T/A克隆技术构建小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达消减cDNA文库.(2)通过斑点杂交筛选、测序及同源性分析获取H446/CDDP细胞差异表达cDNA片段.
结果:成功构建了小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP差异表达消减cDNA文库,获得21个H446/CDDP细胞差异表达cDNA片段,经测序及同源性分析表明它们分别代表6个已知基因(同源性为96％～100％).
结论:本研究表明SSH技术是筛选新的功能基因的有效方法;获取的6个差异表达基因可能参与了小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP的耐药形成,对其功能的进一步研究有利于了解它们在小细胞肺癌多药耐药机制中的作用.