【摘 要】
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目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古霉素参与调节肝细胞糖异生的机制.方法 体外培养人肝细胞系HL7702,分为对照组(5μl DMSO)、胰岛素组(5μl DMSO+100nmol/L胰岛素)
【机 构】
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30070 天津医科大学代谢病医院内分泌研究所,卫生部激素与发育重点实验室,天津市代谢性疾病重点实验室300011,天津市疾病预防控制中心毒理科;430012,武汉市汉口医院内分泌科;
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目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古霉素参与调节肝细胞糖异生的机制.方法 体外培养人肝细胞系HL7702,分为对照组(5μl DMSO)、胰岛素组(5μl DMSO+100nmol/L胰岛素)、曲古霉素联合胰岛素组(2 mol/L曲古霉素+100 nmol/L胰岛素)、地塞米松组(1 mol/L地塞米松)、曲古霉素联合地塞米松组(2 mol/L曲古霉素+1 mol/L地塞米松).采用体外葡萄糖输出、Western印迹和实时荧光定量RT-PCR的方法检测肝细胞体外葡萄糖输出、胰岛素信号分子蛋白激酶B(Akt)、叉头转录因子O1(FoxO1)的磷酸化和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)基因的表达.结果 与对照组相比,胰岛素组葡萄糖输出降低(t=5.35,P＜0.01),而与胰岛素组相比,曲古霉素联合胰岛素组葡萄糖输出增加(t=-14.049,P＜0.01);与对照组相比,地塞米松组葡萄糖输出升高(t=-2.782,P＜0.01),与地塞米松组相比,曲古霉素联合地塞米松组葡萄糖输出升高(t=-2.955,P＜0.05).与对照组相比,胰岛素组磷酸化Akt酪氨酸308、磷酸化Akt丝氨酸473、磷酸化FoxO1丝氨酸256蛋白水平均升高(t=-5.356、-5.004、-3.073,P均＜0.05),PEPCK和G6Pase mRNA水平均降低(t=5.215、4.777,P均＜0.01);与胰岛素组相比,曲古霉素联合胰岛素组磷酸化Akt酪氨酸308、磷酸化Akt丝氨酸473、磷酸化FoxO1丝氨酸256蛋白水平均降低(t=22.152、26.759、3.907,P均＜0.01),PEPCK和G6Pase mRNA水平均升高(t=-3.144、-2.819,P均＜0.05).结论 曲古霉素能够通过抑制Akt和FoxO1磷酸化活性,促进糖异生调节基因的表达,进而促进肝细胞葡萄糖输出.
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