【摘 要】
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通过定点突变的方法,在来源于里氏木霉Trichderma reesei的木聚糖酶XYNII的N-末端两个β折叠片层间添加二硫键,以提高木聚糖酶的稳定性。原酶XYN-OU和突变酶XYN-HA12(T2C、T2
【机 构】
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南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)(Nos.2007AA02Z213,2006AA020204);国家重点基础研究发展计划(973计划)(No.2007CB707800)资助~~
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通过定点突变的方法,在来源于里氏木霉Trichderma reesei的木聚糖酶XYNII的N-末端两个β折叠片层间添加二硫键,以提高木聚糖酶的稳定性。原酶XYN-OU和突变酶XYN-HA12(T2C、T28C和S156F)分别在毕赤酵母中分泌表达,突变酶与原酶纯化后进行酶学性质比较。结果表明:突变酶最适反应温度由50℃提高到60℃;在70℃的半衰期由1min提高到14min;最适反应pH为5.0,与原酶保持一致,但是在50℃、30min条件下的pH稳定范围由4.0~9.0扩展到3.0~10.0。对木聚糖酶分子改良的结果反映出在β片层间添加二硫键可以有效改善酶在较高温度下三维结构的刚性,提高热稳定性。
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