【摘 要】
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目的 研究低剂量顺铂和低浓度天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)联合作用抑制喉癌细胞(Hep-2细胞株和AMC-HN-8细胞株)增殖的作用及其机制.方法 设立不同的实验组,包括低浓度顺铂
【机 构】
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复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻咽喉头颈外科,上海,200031上海交通大学医学院上海市免疫研究所;
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目的 研究低剂量顺铂和低浓度天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)联合作用抑制喉癌细胞(Hep-2细胞株和AMC-HN-8细胞株)增殖的作用及其机制.方法 设立不同的实验组,包括低浓度顺铂组(3 μg/ml)、高浓度顺铂组(10 μg/ml)、TCS组(5μg/ml)、TCS和顺铂联合作用组(5μg/mlTCS和3μg/ml顺铂)和阴性对照组;连续5d使用细胞增殖检测法(cell counting kit-8,CCK-8)和乳酸脱氢酶法检测不同实验组对喉癌细胞的抑制作用和细胞毒性;流式细胞仪和Hochest33258染色观察细胞凋亡;Western blot检测C-Jun氨基端激酶(JNK),磷酸化JNK、核因子κB (nuclear factor κB,NF-κB)、p38、磷酸化p38、κB抑制蛋白(inhibitor of κB,I-κB)及磷酸化I-κB的变化.结果 与TCS和低剂量顺铂单独作用相比,TCS和顺铂联合作用可明显抑制喉癌细胞的生长(P值均<0.01),凋亡细胞数量增加;联合作用组的抑制效果与高浓度顺铂组差异无统计学意义,细胞毒性同TCS和顺铂单独作用相比差异无统计学意义(P>0.05),而毒性低于高浓度顺铂组(P<0.01);Westem blot显示顺铂增强NF-κB转录因子活性,抑制JNK信号通路,TCS组主要激活JNK信号通路而抑制NF-κB,TCS和顺铂联合作用后磷酸化JNK保持高水平抑制NF-κB活性.结论 TCS通过激活JNK信号通路,同时抑制NF-κB转录因子活性,增强顺铂诱导喉癌细胞凋亡比例,从而降低其对细胞的毒性并增强其抗肿瘤疗效,为中药天花粉蛋白联合顺铂应用于喉癌临床治疗奠定了实验基础.
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