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目的：利用长期冷冻人卵裂期胚胎经序贯共培养形成的囊胚建立人类胚胎干细胞系。方法：将冷冻≥10年的卵裂期胚胎复苏后，采用单层卵丘细胞序贯共培养至囊胚期，经辅助孵出，置鼠胚胎成纤维细胞（MEF）饲养层全胚培养，原代培养6d后加入20％MEF条件培养基培养至形成原代克隆。观察人胚胎干细胞集落的生长状态并通过碱性磷酸酶染色、Oct-4基因表达、核型分析及体外分化实验等方法进行生物学鉴定。结果：9枚冷冻卵裂期胚胎经序贯共培养，有6枚发育到囊胚期，最终获得1株胚胎干细胞系。经鉴定该细胞系具有碱性磷酸酶活性、表达Oct