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目的
评价缺氧后处理对糖尿病性心肌细胞缺氧复氧时保护作用削弱的机制及其与DJ-1表达的关系。
方法正常培养的H9c2细胞，采用随机数字表法分为6组(n＝36)：对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)、缺氧后处理组(HPO组)、质粒转染DJ-1基因组(D组)、质粒转染DJ-1基因＋缺氧复氧组(DH组)和质粒转染DJ-1基因＋缺氧复氧＋缺氧后处理组(DHH组)。采用缺氧4 h复氧2 h的方法制备心肌细胞缺氧复氧损伤模型。C组、H/R组和HPO组采用高糖(30 mmol/L)培养基培养H9c2细胞48 h，H/R组和HPO组制备模型，HPO组复氧前行3个循环的复氧5 min，缺氧5 min处理。D组、DH组和DHH组H9c2细胞质粒转染DJ-1基因(pEX-2-EGFP-DJ-1)，随后处理对应以上3组。于复氧2 h时，采用CCK-8试剂盒检测细胞存活率，ELISA法检测上清液LDH水平，电镜下观察自噬小体，Western blot法检测细胞DJ-1、p62表达及LC3Ⅱ/Ⅰ比值。
结果与C组比较，H/R组和HPO组细胞存活率、DJ-1表达水平降低，LDH活性升高(P<0.01)；H/R组与HPO组比较上述指标差异无统计意义(P>0.05)。与D组比较，DH组细胞存活率降低，LDH活性升高(P<0.01)；与DH组比较，DHH组细胞存活率、自噬小体数量、LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高，LDH活性和p62表达水平降低(P<0.01); H/R组与DH组比较上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。
结论缺氧后处理对糖尿病性心肌细胞缺氧复氧时保护作用削弱的机制与高糖抑制DJ-1表达，降低自噬有关。