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目的:构建表达甲型H5N1禽流感病毒(H5N1 avian influenza A virus，H5N1 AIAV)NIBRG14株结构蛋白的重组痘苗病毒，为研制新型人用流感疫苗奠定基础。方法:通过反转录PCR扩增H5N1 AIAV NIBRG14株的血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)编码基因，并将改造的n HA、n NA基因克隆至痘苗病毒穿梭质粒pSCCK。在重组质粒与痘苗病毒天坛株(vaccinia virus Tiantan，VTT)于Vero细胞中发生同源重组后，筛选同时表达HA和NA的重组痘苗病毒(rVTT-HA/NA)，并对其进行鉴定。n 结果:反转录PCR扩增的n HA和n NA基因大小约分别为1 700和1 400 bp，与预期相同。DNA测序证实，改造的n HA和n NA序列正确。对获得的rVTT-HA/NA进行PCR及测序表明，n HA和n NA基因正确插入VTT。蛋白质印迹显示，rVTT-HA/NA感染的Vero细胞表达的HA和NA能与相应的抗体发生反应。表达的HA具有血凝活性，血凝滴度为1∶32。n 结论:重组痘苗病毒rVTT-HA/NA可稳定表达H5N1 AIAV NIBRG14株的HA和NA。