【摘 要】
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高迁移率蛋白 A(high mobility group A,HMGA)与染色质重塑及癌症转移有密切关系.在胚胎期广泛表达,然而在成年期表达量很低,甚至不表达.以本实验室保存的家蚕蛹 cDNA 为模板
【机 构】
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浙江理工大学生命科学学院,陕西理工学院生命科学与工程学院
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高迁移率蛋白 A(high mobility group A,HMGA)与染色质重塑及癌症转移有密切关系.在胚胎期广泛表达,然而在成年期表达量很低,甚至不表达.以本实验室保存的家蚕蛹 cDNA 为模板,克隆家蚕高迁移率蛋白（Bombyx mori high mobility group A,BmHMGA)开放阅读框(345 bp),构建重组质粒 pET-28a(+)-BmHMGA ,并在 BL21Star(DE3)中正确表达融合蛋白 His-BmHMGA.用 Ni-NTA 柱亲和层析纯化融合蛋白,免疫新西兰兔,获得多克隆抗体；抗体效价1∶12800以上,且具有较高特异性.实时荧光定量 PCR 检测结果表明：基因 BmHMGA从卵、5龄幼虫、蛹到蛾,转录水平依次下降；在5龄幼虫期,BmHMGA 基因的转录水平在头、表皮、卵巢、睾丸、脂肪体、气管、马氏管、丝腺和肠中从高到低分布.通过免疫印迹(Western blotting)法和酶联免疫法半定量分析结果显示.BmHMGA 蛋白在家蚕卵中含量最高,蛾中最低；5龄幼虫头部的 BmHMGA 蛋白含量明显高于其他组织,中肠、马氏管中则没有明显的信号,与 RT-PCR 的结果基本一致.家蚕 Bm N 细胞的免疫细胞化学实验结果显示, BmHMGA 蛋白在细胞质中均匀分布.
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