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目的
确定人晶状体上皮细胞(HLEC)系LEC-B3细胞内两种钙池调控系统肌醇1,4,5-三磷酸(IP3)受体和兰尼碱受体的表达,并鉴定其亚型,初步探讨两系统对HLEC内Ca2+的调控作用。
方法传代培养HLEC系LEC-B3细胞,选用第3代融合状态良好的细胞,提取细胞总RNA,反转录获取cDNA,分别用IP3受体的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚型和兰尼碱受体的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚型特异引物进行逆转录聚合酶链反应,判定分析mRNA的表达。并在激光扫描共聚焦显微镜下分别采用一定浓度的乙酰胆碱、阿托品、咖啡因、兰尼碱及普鲁卡因作用于细胞外液含Ca2+、Mg2+和不含Ca2+、Mg2+的同代细胞,观察分析Ca2+信号的变化。
结果HLEC系LEC-B3细胞中分别表达IP3受体和兰尼碱受体的Ⅰ和Ⅲ型mRNA,且均Ⅲ型表达强于Ⅰ型(P<0.05)。10μmol/L乙酰胆碱、10mmol/L咖啡因及50μmol/L兰尼碱均可使细胞内Ca2+浓度增高,而波动的开始时间、幅度及持续时间因细胞外液成分和药物不同而异;1μmol/L阿托品可阻断乙酰胆碱的作用,50μmol/L普鲁卡因可抑制兰尼碱的作用。
结论HLEC系LEC-B3细胞内同时存在IP3受体和兰尼碱受体基因的转录,且存在亚型特异性。两种受体的激动剂和抑制剂均可引起细胞内Ca2+浓度的变化,提示IP3受体和兰尼碱受体系统在HLEC内Ca2+浓度的调控中同时发挥重要作用,其中IP3受体对Ca2+更为敏感。