【摘 要】
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[背景]胶原蛋白广泛应用于日用化工及生物医药中,相比传统方法,基因工程方法制备胶原蛋白具有避免病毒隐患、产量高等优点,逐步受到广泛关注.[目的]获得Ⅲ型类人胶原蛋白基因
【机 构】
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江南大学药学院糖化学与生物技术教育部重点实验室 江苏无锡214122;江南大学生物工程学院粮食发酵工艺与技术国家工程实验室 江苏无锡214122
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[背景]胶原蛋白广泛应用于日用化工及生物医药中,相比传统方法,基因工程方法制备胶原蛋白具有避免病毒隐患、产量高等优点,逐步受到广泛关注.[目的]获得Ⅲ型类人胶原蛋白基因,实现大肠杆菌中的异源表达.[方法]以人Ⅲ胶原蛋白al链为模板,(Gly-X-Y)为最小研究单位,优选亲水性氨基酸,设计目标基因kit,构建重组大肠杆菌(Escherichia coli)pET-28a(+)-kit/BL21(DE3),并对其结构进行表征.[结果]类人胶原蛋白基因kit成功在大肠杆菌体系中表达,表达量约为0.53 g/L,7L发酵罐上补料发酵后其最大表达量提高至3.02 g/L,亲和层析纯化类人胶原蛋白纯度约为91％,对其进行N端测序、氨基酸分析、质谱分析及圆二色谱分析,确定类人胶原蛋白成功表达.[结论]类人胶原蛋白的成功表达为未来规模化制备及其在日用化工及生物医药行业的应用奠定了基础.
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