【摘 要】
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目的构建天蚕素A-死亡素复合基因工程抗菌肽基因CA(1-7)-T(4-19),并在毕赤酵母中表达。方法采用重叠区基因扩增法(SOE)人工合成复合肽基因,同载体pPICZαA连接后转化毕赤酵母
【机 构】
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潍坊医学院附属医院检验科/临床检验诊断学省级重点实验室
【基金项目】
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潍坊医学院科技创新基金资助项目(K1302023)
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目的构建天蚕素A-死亡素复合基因工程抗菌肽基因CA(1-7)-T(4-19),并在毕赤酵母中表达。方法采用重叠区基因扩增法(SOE)人工合成复合肽基因,同载体pPICZαA连接后转化毕赤酵母受体菌X-33,通过博莱霉素抗性筛选得到的阳性克隆用甲醇诱导表达,并对产物进行抗菌活性检测,建立抗菌谱。结果复合肽基因CA(1-7)-T(4-19)成功克隆到载体pPICZαA上,鉴定结果与预先设计的基因序列一致,在甲醇诱导下复合肽基因得到表达,并得到临床分离的76株革兰阴性和革兰阳性耐药致病菌的最小抑菌浓度,最小抑菌浓度可达到5μg/mL。结论成功获得了具有抑菌活性的复合基因工程抗菌肽,且该复合肽对临床常见多重耐药菌株均有明显的抑杀作用。
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