背景:目前越来越多的研究证实miR-146b在神经系统中发挥重要作用,其为神经系统性疾病提供新的治疗方向。目的:构建大鼠miR-146b过表达慢病毒载体,观察miR-146b过表达对原代海马神经干细胞增殖的影响。方法:①PCR扩增获得大鼠miR-146b全长序列,经酶切连接到慢病毒载体pLVX-Luciferase-Puro,经双酶切和DNA测序鉴定,然后用293T细胞进行慢病毒包装并收集病毒上清液;②分离和培养新生SD大鼠原代海马神经干细胞,采用pLVX-Luciferase-rno-miR-146b-Puro慢病毒转染海马神经干细胞,转染24,48 h后采用RT-PCR检测miR-146b的表达水平,免疫荧光检测Nestin的表达,MTS法和Edu法检测细胞增殖情况,转染48 h后采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果与结论:①测序鉴定结果显示大鼠miR-146b成功克隆至pLVX–Luciferase-Puro过表达载体中;②转染24 h和48 h后海马神经干细胞中miR-146b表达水平均显著升高;③miR-146b过表达后Nestin免疫荧光阳性细胞数量显著减少,细胞增殖率下降,细胞周期主要停留在G1期;④结果表明,成功包装大鼠miR-146b过表达慢病毒载体,转染后能抑制大鼠原代海马神经干细胞增殖,但其具体调控的靶基因作用机制有待进一步研究。