探讨芪参活血颗粒含药血清对脓毒症大鼠心肌细胞(H9C2)过度自噬的抑制作用及其对脓毒症心肌细胞的保护作用。
方法12只SPF级Wistar大鼠，按芪参活血颗粒低、中、高剂量[分别相当于生药12.7、25.4、50.8 g/(kg·d)]灌胃制备含药血清。将传代培养的大鼠胚胎心肌细胞(H9C2)分为五组：对照组以含10%胎牛血清的DMEM培养；脂多糖(LPS)组以含10%胎牛血清的DMEM+1 μg/ml的LPS培养；LPS+芪参活血颗粒低、中、高剂量组分别以含10%低、中、高剂量含药血清的DMEM预干预4 h后加入1 μg/ml的LPS。共同培养4 h后，应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测自噬标志物Beclin-1、ATG5和LC3B的mRNA及蛋白表达；共同培育8、12、24、48 h后，采用CCK-8法检测各组细胞在不同时间点的细胞活性。
结果与对照组比较，LPS组自噬标志物Beclin-1、ATG5 mRNA及Beclin-1、ATG5、LC3B蛋白表达在LPS干预细胞早期(4 h)即升高，差异有统计学意义(P<0.05)。与LPS组比较，LPS+芪参活血颗粒各剂量组均可降低LPS导致的Beclin-1、ATG5、LC3B的mRNA升高及蛋白的过表达，差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8法检测细胞活性实验显示：LPS组及LPS+芪参活血颗粒低、中、高剂量组在12、24 h及48 h细胞活性明显下降，与对照组差异有统计学意义(P<0.05)；而LPS+芪参活血颗粒中剂量组24、48 h的细胞活性较LPS组明显上升，差异有统计学意义(P<0.05)。
结论不同浓度芪参活血颗粒含药血清对LPS诱导的心肌细胞自噬均有抑制作用，且中剂量芪参活血颗粒灌胃大鼠获得的含药血清可通过抑制自噬改善脓毒症心肌损伤。