【摘 要】
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目的 建立一种检测人类8型疱疹病毒(HHV-8)载量的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,并进行初步诊断应用.方法 分别构建HHV-8开放阅读框(ORF)26和内参照基因β-actin
【机 构】
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新疆医科大学第一附属医院医学研究中心,新疆医科大学第一附属医院皮肤科
【基金项目】
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新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目;
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目的 建立一种检测人类8型疱疹病毒(HHV-8)载量的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,并进行初步诊断应用.方法 分别构建HHV-8开放阅读框(ORF)26和内参照基因β-actin重组T载体,制备质粒标准品.确定最佳实验条件,建立高灵敏度的RT-qPCR方法.并检测30份经病理学确诊的卡波西肉瘤(KS)石蜡组织中HHV-8载量,初步评价其应用的有效性.结果 明确了建立该法的最关键因素为退火温度和延伸环节.标准曲线参数良好,ORF26和β-actin标准品Ct值与其相应梯度稀释标准品浓度呈良好线性关系(γ2＞0.990),扩增效率分别为88.3%和90.3%.经熔解曲线和电泳分析,产物特异.30份KS样本中HH V-8 ORF26的检出率为100%.经典型KS中HHV-8载量显著高于AIDS相关型KS(均数分别为69.18和8.63,x2=7.950,P=0.005).结论 成功建立了灵敏度高的HHV-8实时荧光定量PCR检测方法,为临床诊断可疑或感染病例提供了技术平台.
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