【摘 要】
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目的 观察针对人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA (shRNA)质粒表达载体对乳腺癌T47D细胞端粒酶活性及增殖能力的影响.方法 将针对hTERT的5种shRNA质粒表达载 体并转染到乳腺癌T47D细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测hTERT在mRNA和蛋白水平上的表达；抗酒石酸酸性磷酸酶-酶联免疫吸附试验(TRAP-ELISA)法检测细胞的端
【机 构】
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目的 观察针对人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA (shRNA)质粒表达载体对乳腺癌T47D细胞端粒酶活性及增殖能力的影响.方法 将针对hTERT的5种shRNA质粒表达载 体并转染到乳腺癌T47D细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测hTERT在mRNA和蛋白水平上的表达；抗酒石酸酸性磷酸酶-酶联免疫吸附试验(TRAP-ELISA)法检测细胞的端粒酶活性变化；噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪结合碘化丙锭(PI)染色检测细胞周期分布.结果 同对照组T47D细胞比较,小干扰RNA(siRNA)1组和阴性对照siRNA2-N组hTERT基因在mRNA和蛋白水平的表达以及细胞端粒酶活性的变化差异无统计学意义(P＞0.05),而siRNA2组分别下降57.1％、57.0％和57.0(P＜0.01),siRNA3组分别下降53.7％、53.4％和56.5％ (P＜0.01),siRNA4组分别下降70.0％、70.3％和81.9％ (P＜0.01)；siRNA1、siRNA2-N组细胞生长速度及各期细胞比例差异无统计学意义(P＞0.05),而siRNA2、siRNA3和siRNA4组细胞自24h起就出现生长速度明显降低(P＜0.01),G0/G1期细胞比例增高(P＜0.01)和S期细胞比例降低(P＜0.01).结论 针对hTERT的shRNA可抑制肿瘤细胞的增殖。
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