【摘 要】
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目的 构建表达鼠疫耶尔森杆菌(Yersinia Pestis)YP01668的重组蛋白,为鼠疫耶尔森杆菌诊断试剂的研究提供依据.方法 用经典PCR方法扩增,ypo1668基因,通过双酶切、连接反应,将
【机 构】
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南方医科大学南方医院消化病研究所,中国疾病预防控制中心传染病控制所诊断室
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目的 构建表达鼠疫耶尔森杆菌(Yersinia Pestis)YP01668的重组蛋白,为鼠疫耶尔森杆菌诊断试剂的研究提供依据.方法 用经典PCR方法扩增,ypo1668基因,通过双酶切、连接反应,将目的 基因片段定向插入到表达载体pET-32a(+)上,转化至E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的 基因表达并纯化该目的 蛋白,通过SDS-PAGE方法对表达的蛋白产物进行初步分析后,经Western Blot分析其免疫原性.结果 双酶切鉴定及DNA测序结果显示,目的 基因ypo1668已成功连接到表达载体pET32a(+)上,SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量约为64.95kDa,融合蛋白的可溶部分较大.Western-blot结果显示重组YPO1668可与鼠疫诊断血清发生特异性反应.结论 成功克隆构建了pET32a-YPO1668融合基因原核表达系统,该融合蛋白具有较好的可溶性及免疫原性,成为研发新型鼠疫耶尔森杆菌诊断试剂的优良备选抗原.
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