【摘 要】
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目的从节杆菌Arthrobactersp.XL2胞内中初步提取黄嘌呤氧化酶(XOD)。方法探讨了不同破壁方法和硫酸铵盐析提取粗酶的条件。采用响应面分析法优化了超声波法抽提XOD的条件。结
【机 构】
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江南大学工业生物技术教育部重点实验室,福州大学化学化工学院
【基金项目】
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工业微生物教育部重点实验室基金(KLIB-KF200502);福建省自然科学基金(C0410006)资助项目
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目的从节杆菌Arthrobactersp.XL2胞内中初步提取黄嘌呤氧化酶(XOD)。方法探讨了不同破壁方法和硫酸铵盐析提取粗酶的条件。采用响应面分析法优化了超声波法抽提XOD的条件。结果菌体用超声波破壁,在频率25 KHz,细胞浓度80 mg/mL下每次辐射2 s,间隔2 s,总辐射时间18 min,输出功率400 W,破碎产酶量达到(4.69±0.11)U/mL。用40%~60%饱和度硫酸铵阶段盐析提取粗酶效果最好。将盐析粗酶用Sephadex G-25脱盐后,比酶活达到6.95 U/mg,纯度提高了3.43倍,然后进行XOD粗酶部分酶学性质研究。XOD的稳定pH和温度范围分别为:pH 7.0~9.0和低于50℃。XOD的最适反应温度和pH分别为:40℃及pH 8.0。Zn2+,Cd2+,Cu2+,Pb2+,Ag+,Hg2+强烈抑制酶的活性。结论此粗酶提取工艺可以有效地将XOD从细胞内释放出来,提高了粗酶抽提得率。为后续的进一步纯化研究奠定了基础。
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