初步探讨苯丙胺(amphetamine,AMPH)模型大鼠海马的微小核糖核酸(microRNA)的表达情况。
方法应用micro RNA微阵列芯片技术筛选AMPH模型大鼠(AMPH模型组,10只)和对照大鼠(对照组,10只)海马差异表达microRNA;选取有明显表达变化的micro RNA,采用实时定量聚合酶链反应、免疫印迹法验证相关靶基因及蛋白在AMPH模型大鼠海马的表达变化。
结果(1)旷场实验:AMPH模型组水平运动格子数(28.21±2.22)个,垂直运动次数(82.33±4.61)次,均高于对照组[(17.10±1.94)个、(52.32±3.76)次],差异有统计学意义(t=11.92,P<0.01;t=15.95,P<0.01)。(2)AMPH模型组共有136个microRNA表达,其中,上调>2倍的microRNA有14个,下调>2倍的microRNA有6个;上调>5倍的microRNA有3个,分别为microRNA-134、microRNA-143、microRNA-96,下调>5倍的microRNA有2个,分别为microRNA-132、microRNA-210;实时定量聚合酶链反应验证了以上结果;通过microRNA特异性的靶标检测系统(miRanda)推测microRNA-134、microRNA-143、microRNA-96、microRNA-132、micro RNA-210靶基因分别为谷氨酸受体1(GRM-1)、脑源性神经营养因子(BDNF)以及生长抑素(SSTR-1)。(3)免疫印迹法检测预测靶蛋白表达结果:AMPH模型组GRM-1为0.18±0.02、BDNF为0.21±0.02、SSTR-1为0.42±0.02,较对照组(分别为0.28±0.03、0.31±0.03、0.59±0.03)含量均下调,差异有统计学意义(t=8.77,P<0.05; t=8.77,P<0.05; t=14.91,P<0.05)。
结论AMPH模型中海马microRNA呈差异表达。