研究基因粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-12基因联合作用对H22肝癌细胞凋亡的影响。
方法体外培养肝癌细胞株，分别设置GM-CSF转染组、IL-12转染组、GM-CSF和IL-12共染组、阴性对照组(空载组)。构建PIB-CMV3-GM-CSF和PIB-CMV3-IL-12真核表达载体，转染肝癌细胞36 h后，采用荧光显微镜检测转染效果；RT-PCR检测IL-12、GM-CSF、p53、p38及(C-JUN mRNA表达水平；Western blot法检测IL-12、GM-CSF、p53、p38及C-JUN蛋白表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡情况。
结果经荧光显微镜观察发现，转染GM-CSF组、转染IL-12组及共转染组均有较强的绿色荧光，说明质粒成功转入细胞。另外，空载组、GM-CSF转染组、IL-12转染组、GM-CSF和IL-12基因联合组p53 mRNA的表达量分别为1.2±0.10、4.3±0.98、4.2±0.34、9.2±0.87，蛋白表达量分别为1.0±0.10、3.6±0.34、3.8±0.30、5.0±0.60，与空载组比较，3组质粒转染组p53 mRNA和蛋白表达量均显著上调(P均<0.01)；而与转染GM-CSF组、转染IL-12组比较发现，联合组能更加明显上调p53 mRNA和蛋白的表达量(P均<0.01)。与此同时，空载组、GM-CSF转染组、IL-12转染组、GM-CSF和IL-12基因联合组p38 mRNA表达量分别为7.5±0.9、3.5±0.45、3.7±0.25、1.0±0.11，p38蛋白表达量分别为10.1±1.03、6.1±0.67、7.1±0.61、1.0±0.12，C-JUN mRNA分别为11.2±1.20、4.1±0.19、3.3±0.30、1.0±0.01，C-JUN蛋白分别为2.25±0.2、1.8±0.13、1.4±0.12、1.0±0.09，与空载组相比，3组质粒转染组p38和C-JUN mRNA和蛋白的表达量均显著下调(P均<0.01)；与转染GM-CSF组、转染IL-12组比较发现，联合组能更加明显的下调p38和C-JUN mRNA和蛋白的表达量(P均<0.01)。流式细胞术检测结果显示，空载组、GM-CSF转染组、IL-12转染组、GM-CSF和IL-12基因联合组细胞早期凋亡率分别为(3.43±0.9)%、(5.87±1.02)%、(7.32±1.1)%、(17.47±2.11)%，与空载组比较，3组质粒转染组细胞早期凋亡率均显著的上调(P均<0.01);并且基因联合组细胞早期凋亡率与其他质粒组相比上调趋势更加明显(P均<0.01)。
结论GM-CSF和IL-12基因联合作用可显著促进肝癌细胞凋亡，其作用机制可能是通过上调p53的表达、抑制p38和C-JUN的表达，进而促进肝癌细胞凋亡。