【摘 要】
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鸡毒支原体(MG)粘附蛋白是MG定植于宿主细胞表面的关键因子,并在MG致病过程中发挥着重要作用.为筛选并鉴定MG新的粘附蛋白,本研究根据生物信息学软件对MG S6基因组全部序列进
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病创新团队,吉林农业大学动物科技学院,东北农业大学资源与环境学院,东北农业大学动物医学学院
【基金项目】
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2015兽医生物技术国家重点实验室动物支原体创新团队经费;
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鸡毒支原体(MG)粘附蛋白是MG定植于宿主细胞表面的关键因子,并在MG致病过程中发挥着重要作用.为筛选并鉴定MG新的粘附蛋白,本研究根据生物信息学软件对MG S6基因组全部序列进行分析,选取了MG的一个假定膜蛋白基因,其大小为675 bp(编码225个氨基酸,分子量约25 ku,将其命名为P25).通过MG膜蛋白组分的提取及western blot鉴定,结果显示P25分布在MG膜的表面.利用PCR扩增MG p25基因并通过定点突变将其序列中TGA终止密码子突变为TGG(编码色氨酸),通过原核表达其编码的重组P25蛋白(rP25),并以rP25作为免疫原免疫兔子制备高免血清.激光共聚焦显微镜观察显示rP25和MG均对鸡胚成纤维细胞系(DF-1)具有明显的粘附作用,而ELISA和流式细胞仪检测结果则表明rP25和MG对DF-1细胞的粘附为特异性粘附,其中rP25抗血清可以明显抑制rP25和MG对DF-1细胞的粘附作用,从而证明P25为MG的一个粘附相关蛋白.
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