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[目的]制备、筛选稳定分泌B型内毒毒素单抗的杂交瘤克隆，为相关研究提供工具。[方法]采用纯化的B型肉毒毒素免疫BALB／c小鼠，用免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2／0融合，筛选阳性克隆。[结果]得到10株稳定分泌B型内毒毒素单抗的杂交瘤克隆，1株为IgM，其余9株分泌IgG，亚类为IgG2a。10株单克隆抗体均与B型内毒毒素呈特异性反应，而与标准A型内毒毒素无交叉反应，腹水单抗的效价均在105以上。[结论]10株杂交瘤细胞株均能分泌抗B型肉毒毒素单克隆抗体，为B型肉毒毒素的检测和研究提供了工具。