目的 观察人碱性成纤维生长因子(bFGF)基因修饰大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在体外向血管内皮样细胞分化的能力.方法 利用密度梯度离心分离和贴壁培养相结合的方法从SD大鼠骨髓中提纯单个核细胞,体外扩增3代,倒置显微镜观察细胞生长及形态,流式细胞仪检测BMSCs表面抗原表达.取扩增第3代的BMSCs,分为3组:阴性对照组(普通的BMSCs组)、空白对照组(不含bFGF基因但含有GFP的慢病毒载体转染组)、实验组(含bFGF目的基因的慢病毒载体转染组),3组同法培养[培养基10％胎牛血清、50 μg/L血管内皮生长因子(VEGF)的L-DMEM培养基].1周后各组上清液ELSIA法测定bFGF含量,4周后各组行细胞形态学观察,免疫细胞化学法检测细胞表面标记分子CD31、CD34及Ⅷ子的表达及Dil-AC-LDL吞噬实验等.结果 流式细胞仪显示分离、培养的第3代BMSCs表面抗原阳性表达率:CD11 b/c和CD34分别为(14.16±0.72)％和(1.29±0.46)％,而CD44和CD90分别为(97.87±0.84)％和(96.85±1.49)％.实验组bFGF分泌量(5.50 ±0.12) ng/L明显高于空白对照组(2.65 ±0.40) ng/L和阴性对照组(2.76±0.25) ng/L,实验组与空白对照组以及阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；3组大部分细胞形态变化不明显,呈长梭形、杆状、多角形.实验组CD31、CD34及Ⅷ因子阳性表达率分别为(22.73±5.42)％、(26.32±3.95)％和(30.34±6.62)％,而空白对照组和阴性对照组则为[(7.85±1.83)％、(8.93±1.37)％、(10.23 ±1.21)％[和[(7.57±1.21)％、(8.41±0.97)％、(9.97±0.52)％],实验组与空白对照组以及阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；诱导后实验组细胞能有效地吞噬Dil-AC-LDL,表达荧光的平均吸光度值,实验组(0.52±0.23)明显高于阴性对照组(0.05 ±0.03)和空白对照组(0.07 ±0.02),实验组与空白对照组以及阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 人bFGF基因修饰的BMSCs能分泌bFGF,在VEGF的诱导下该细胞能够更有效地向血管内皮细胞样细胞分化。
人碱性成纤维生长因子基因修饰大鼠骨髓间充质干细胞的研究
【摘 要】
：
目的 观察人碱性成纤维生长因子(bFGF)基因修饰大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在体外向血管内皮样细胞分化的能力.方法 利用密度梯度离心分离和贴壁培养相结合的方法从SD大鼠骨髓中提纯单个核细胞,体外扩增3代,倒置显微镜观察细胞生长及形态,流式细胞仪检测BMSCs表面抗原表达.取扩增第3代的BMSCs,分为3组:阴性对照组(普通的BMSCs组)、空白对照组(不含bFGF基因但含有GFP的慢病毒载
【机 构】
：
350005福州,福建医科大学附属第一医院血管外科福建医科大学血管与腔内血管外科研究室,350005福州,福建医科大学附属第一医院血管外科福建医科大学血管与腔内血管外科研究室,350005福州,福建医
【出 处】
：
中华实验外科杂志
【发表日期】
：
2013年30期
论文部分内容阅读
其他文献
目的 探讨调节性树突状细胞(rDC)对大鼠同种异体排斥反应的调控及其效应.方法 大鼠腹腔心脏移植前7d,受者静脉输注供者来源未成熟DC(imDC)、成熟DC(matDC)、rDC和磷酸盐缓冲液(PBS).观察移植物体存活时间,比较排异反应病理分级,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测受者淋巴结细胞叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3) mRNA表达.结果 rDC组(18.6 d)移植物平均生存
目的 观察不同剂量伽玛(γ)射线诱导脑膜瘤细胞凋亡和原癌基因c-myc表达变化.方法 采用机械分离法获得稳定生长脑膜瘤细胞的离体培养细胞株,根据不同照射剂量分为4组,照射组分别接受中心剂量为2.00、5.00、8.22、13.33 Gy,设立对照组,剂量为0,照射后荧光显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,Westem blot法检测c-myc蛋白的表达变化.结果 对照组、照射1
目的 观察慢性牙周炎伴2型糖尿病患者经牙周基础治疗后血清白细胞介素-6（IL-6）和瘦素（1eptin）的变化。方法选择河南省商丘市第一人民医院2009年6月至2012年2月慢性牙周炎伴2型糖尿病患者34例作为观察组，同期慢性牙周炎患者不伴有全身系统性疾病34例作为对照组，两组均进行牙周基础治疗。分别在治疗前和治疗后3个月记录两组患者探诊出血（BOP）、牙周探诊深度（PD）、附着丧失（AL）以及血
期刊
我们比较不同空肠吻合术后的制模效果,探讨幼兔胆肠吻合术理想空肠吻合方式.一、材料与方法1.实验动物和主要器械:选取北京沙河通利实验动物养殖场所饲养的清洁级1月龄,体质量为(600 ±20)g的新西兰幼兔60只[许可证号SCXK(京)2010-004].北京大学医学部常规驱虫治疗,适应性喂养1周.依据空肠端-侧方式随机数字表法分为:单层连续缝合组(SLCSG)、单层间断缝合组(SLISG)、单层连续
期刊
近年来,椎间盘退变基因治疗的实验研究较多.既往基因转染多采用腺病毒载体,但其具有免疫原性高、转染率低的特点[1];我们采用腺相关病毒(AAV)介导骨形态发生蛋白(BMP)-7和性别决定区Y框蛋白9(SOX9)双基因体内转染退变兔椎间盘髓核细胞,探讨体内应用腺相关病毒介导正向调控因子对退变椎间盘基因治疗的可能性.一、材料与方法1.材料:健康成年新西兰大白兔15只(山东省实验动物中心提供),雌雄不限,
期刊
目的 探讨含血Plegisol液微流量持续灌注对热缺血猪心的心肌保护作用及其机制.方法 12个离体猪心,随机分为实验组(n=6,热缺血10 min,4℃含血微流量连续灌注8h,移植期间温血连续灌注)和对照组(n=6,热缺血10 min,4℃Plegisol液单纯浸泡8h),进行原位心脏移植.所有猪心恢复跳动再灌注24h后观察各组心肌组织的病理变化；分别测定心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙
目的 探讨髋臼双柱骨折经前路内固定术后早期站位的安全性.方法 选择1例成年健康男性志愿者CT扫描,Mimics8.1重建半骨盆有限元模型,经网格划分及附值后构建前路特殊塑形钛板加方形区螺钉固定髋臼双柱骨折的半骨盆有限模型,模拟单足站位加载500 N轴向载荷,分析各部位应力及位移情况.结果 骨折经内固定后应力分布均匀,应力集中出现在钛板与螺钉结合处,最大应力为838 MPa,小于材料屈服强度；近端第
目的 观察特异性小干扰RNA (siRNA)沉默Cbl-b基因对于小鼠脾脏T淋巴细胞免疫活性影响.方法 尼龙毛柱法分离T淋巴细胞,加入抗CD3抗体(1 mg/L)在体外模拟T淋巴细胞活化的第一信号,脂质体转染12、24、48 h后,流式细胞仪检测早、中、晚期活化标志分子CD69、CD25、CD71的表达变化；转染48 h后细胞计数试剂盒(CCK-8)试剂盒检测T淋巴细胞增殖程度.结果 利用特异性C
目的 克隆人Importin 8(IPO8)基因,观察IPO8与绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在宫颈癌细胞HeLa内的表达和定位.方法 以HeLa细胞总RNA为模板进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增全长IPO8编码序列,经Hind Ⅲ和Xba Ⅰ双酶切后,插入GFP质粒pEGFP-C1,构建pEGFP-IPO8重组表达载体.瞬时转染重组质粒入HeLa细胞,荧光显微镜观察pE
目的 观察人胆管癌细胞来源的exosome及exosome裂解超滤液(UEL)对树突状细胞/细胞毒性T淋巴细胞诱导(DC/CTL)混合细胞抗肿瘤活性的影响及机制.方法 采用超速离心法提取人胆管癌细胞(RBE细胞)释放的exosome,低渗法裂解exosome,超滤法去除exosome来源微小RNA(exosomal miRNA)并提纯exosome裂解超滤液.将exosome及其裂解超滤液分别负载