【摘 要】
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N-乙酰谷氨酸合成酶催化生成的N-乙酰谷氨酸(NAGS)对于哺乳动物尿素循环第一个酶--氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ变象异构激活是必需的.N-乙酰谷氨酸合成酶定位于肝脏和小肠线粒体基
【机 构】
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长沙大学,中国科学院亚热带农业生态研究所,中国科学院研究生院,广西师范大学生命科学学院
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N-乙酰谷氨酸合成酶催化生成的N-乙酰谷氨酸(NAGS)对于哺乳动物尿素循环第一个酶--氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ变象异构激活是必需的.N-乙酰谷氨酸合成酶定位于肝脏和小肠线粒体基质中,通过提供N-乙酰谷氨酸调节氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ的活性来调节尿素合成.我们用RT-PCR方法从宁乡猪肝脏中扩增了N-乙酰谷氨酸合成酶的开发阅读框,并将此基因连接到原核表达载体上,构建了pET-NAGS质粒.将重组质粒转化到Ecoli BL21(DE3),在IPTG诱导下表达His-NAGS融合蛋白.通过SDS-PAGE,得出NAGS分子量约为40kDa.一步亲和层析纯化后,我们将纯化后的NAGS蛋白注射到新西兰大白兔中制备多克隆抗体.通过免疫组化和免疫印迹测试抗体,结果表明此抗体有较好的抗原性和特异性.据我们所知,这是第一次在大肠杆菌中表达来源于宁乡猪的NAGS.
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