人肝癌血管内皮细胞表型及功能特性的研究

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目的 分析人肝癌血管内皮细胞(T3A)在表型和功能上的特性。方法 从人原发性肝癌组织分离、纯化和培养血管内皮细胞,并分析比较其与肝窦内皮细胞(LSEC)在形态、表型和功能上的差别。用电子显微镜,检查细胞表面窗孔样结构;用流式细胞仪和荧光定量PCR,分析细胞表型的差别;用噻唑盐(MTT)比色法,分析比较TNFα诱导的细胞毒作用;用酶谱法和体外血管生成模型,评价细胞的血管生成能力;用酶联免疫吸附试验(ELISA),比较凝血和纤溶因子的释放。结果人T3A细胞表达经典的血管内皮细胞标志vWF和CD31,并摄取乙酰化低密度脂蛋白,细胞表面存在大量无隔膜的窗孔样结构。表型分析发现,与肝窦内皮细胞相比,T3A细胞表达TNF受体p75增加,而表达TNF受体p55降低;ICAM-1的表达明显下调,而αvβ3和αv65的表达明显上调,这些改变与荧光定量PCR分析的结果一致。功能学研究发现,T3A细胞对TNFd诱导的细胞毒作用明显耐受,血管生成能力明显增强并具有高表达的凝血和纤溶活性。结论 人T3A细胞在表型和功能上都具有一定的特殊性。

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