【摘 要】
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为了解人TAGE的解整合素域对肿瘤细胞粘附和侵袭的影响以及其独立于其他结构域发挥作用的能力,从单核细胞系THP1中提取RNA,RT-PCR扩增出TAGE全长基因,构建了pMD18T-TAGE载体.
【机 构】
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华中科技大学同济医学院生化与分子生物学系,华中科技大学同济医学院附属同济医院小儿内科
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为了解人TAGE的解整合素域对肿瘤细胞粘附和侵袭的影响以及其独立于其他结构域发挥作用的能力,从单核细胞系THP1中提取RNA,RT-PCR扩增出TAGE全长基因,构建了pMD18T-TAGE载体.对pMD18T-TAGE质粒进行PCR,分别扩增T300(300bp,编码解整合素域)、T800(800bp,编码酶催化域)及T1300(1300bp,编码胞外域)三个片段,将其分别亚克隆至表达载体pET28a(+).把质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),表达产物均以不溶性包涵体形式存在.经过溶解包涵体、BBST NTA树脂枉亲和层析并透析复性,获得高纯度的三种活性蛋白.MTT法、细胞粘附实验、Transwell小室侵袭实验分别显示TAGE解整合素域、胞外域蛋白均能明显抑制A549细胞的增殖,且以剂量依赖性的方式抑制A549细胞与纤维粘连蛋白的粘附,并能抑制Transwell小室中A549细胞对Matrigel模拟的天然基底膜的侵袭,而酶催化域蛋白则无相应的抑制能力.表明重组TAGE解整合素域蛋白可独立抑制肿瘤细胞的增殖、粘附和侵袭,为深入研究该区域的作用及TAGE在肿瘤发病中的机制提供了新的认识.
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