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目的
通过诱导低氧诱导因子(HIF)-1α蛋白去类泛素化修饰降低子宫内膜癌干细胞的干性维持潜能,并增加其对化疗药物的敏感性。
方法利用慢病毒质粒介导基因转染沉默KLE子宫内膜癌细胞泛素载体蛋白9(Ubc9)表达,免疫印迹方法检测Ubc9、小泛素相关修饰蛋白(SUMO)-1和HIF-1α蛋白表达水平;96孔板中培养并计算肿瘤干细胞克隆形成率及克隆球直径;流式细胞周期术检测细胞周期变化;MTT细胞毒性实验和流式细胞凋亡方法检测Ubc9沉默对子宫内膜癌干细胞对化疗药物顺铂的治疗敏感性。
结果免疫印迹结果显示,Ubc9基因沉默效果良好,共价结合状态的SUMO-1及HIF-1α蛋白水平明显下降(P<0.05);Ubc9基因沉默使子宫内膜癌干细胞克隆形成率由(31.61±5.29)%下降至(11.42±3.07)%,同时细胞周期由G1向G2期后移,顺铂IC50由44.37 mg/L下降至7.39 mg/L,细胞凋亡率由(26.22±4.03)%下降至(41.59±5.37)%。
结论通过沉默Ubc9基因表达能够诱导HIF-1α蛋白去SUMO化修饰,进而降低子宫内膜癌干细胞干性维持能力,并增强其化疗敏感性,为未来子宫内膜癌的基因治疗提供了新的参考和借鉴。