观察人脐带间充质干细胞(hUCMSC)外泌体对蓝光损伤后人视网膜色素上皮(RPE)细胞血管内皮生长因子A(VEGF-A)表达的影响。
方法培养hUCMSC，收集上清液，采取梯度超速离心法分离纯化外泌体。应用透射电子显微镜观察外泌体形态；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测hUCMSC外泌体表面特异性标志蛋白CD63及hUCMSC表面蛋白CD90的表达。取生长良好的人RPE细胞，随机分为正常对照组、光损伤组和hUCMSC外泌体处理组。光损伤组和hUCMSC外泌体处理组以蓝光(2000±500) Lux照射RPE细胞12 h建立光损伤模型；hUCMSC外泌体处理组细胞培养液中分别加入25、50、75 μg/ml的hUCMSC外泌体，并以此分为低浓度、中浓度、高浓度3个亚组。各浓度亚组继续培养8、16、24 h结束培养。采用Western blot及免疫荧光检测各组RPE细胞VEGF-A蛋白表达，实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组RPE细胞VEGF-A mRNA表达。
结果透射电子显微镜观察发现，hUCMSC外泌体为圆形或椭圆形膜性小囊泡，直径50～100 nm。Western blot检测结果显示，hUCMSC外泌体表达外泌体表面特异性标志蛋白CD63及hUCMSC表面蛋白CD90。Western blot及RT-PCR检测结果显示，光损伤组RPE细胞VEGF-A蛋白及mRNA表达较正常对照组明显增加，差异有统计学意义(t＝－16.553、－19.456，P<0.05)。hUCMSC外泌体处理组RPE细胞培养8、16、24 h时，低浓度、中浓度、高浓度亚组RPE细胞与光损伤组RPE细胞相比，VEGF-A蛋白及mRNA表达均有下降，差异均有统计学意义(P<0.05)。随hUCMSC外泌体作用时间延长及作用浓度增强，RPE细胞VEGF-A蛋白及mRNA下调作用越强(P<0.05)。免疫荧光检测结果显示，相同作用时间随着hUCMSC外泌体作用浓度提高，VEGF-A蛋白表达不断下降。
结论hUCMSC外泌体能够有效降低蓝光损伤后人RPE细胞VEGF-A的表达，其效应与hUCMSC外泌体作用浓度、时间呈正相关。