【摘 要】
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目的:通过原核表达系统制备鸟分枝杆菌EsxH蛋白,并将其作用于U937细胞,初步探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法:利用PCR扩增出EsxH编码序列,与表达载体pGEX-4T-3连接,构建重组
【基金项目】
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广西自然科学基金项目(2015GXNSFAA139077)
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目的:通过原核表达系统制备鸟分枝杆菌EsxH蛋白,并将其作用于U937细胞,初步探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法:利用PCR扩增出EsxH编码序列,与表达载体pGEX-4T-3连接,构建重组载体pGEX-EsxH,将重组表达载体pGEX-EsxH转化入E. coli BL21 (DE3),在IPTG作用下诱导表达目的蛋白。用超声破碎仪对菌体进行破碎,取上清通过谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱纯化GST-EsxH融合蛋白。将纯化后的蛋白作用于U937细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:扩增出基因片段大小为294 b
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