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摘 要：随着畜牧产业的规模化、集约化程度地提高，为促进动物疫病控制，县级兽医实验室监测能力逐步得到提升，现不仅能开展凝集试验、酶联免疫吸附实验、试管凝集实验等血清学检测，随着分子生物学实验室的建立，可以开展聚合酶链式反应进行病原学检测。因为监测任务的加大，各养殖场（户）及基层兽医人员在采样送样中因技术水平、思想认识等方面的原因，存在不少问题，影响检测效果和疫病诊断，笔者根据多年来在兽医实验室工作的经验，针对当前动物疫病监测采样中存在的一些问题并提出相应注意事项，以便保证采样质量，促进动物疫病诊断工作。
关键词： 动物疫病；监测采样；问题；注意事项
中图分类号：S852.4 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20170932107
1 采集样品中存在的问题
1.1 采集血样中存在的问题
溶血，是实验室收取血样中最常出现的问题，是因放置不稳、倒置或送样中受到剧烈震荡、采血管受污染等原因所致；腐败变质，因未冷藏保存、未及时送到实验室引起；血清不析出，在牛、鸡血样品中易出现这种现象；呈胶冻状，血清分离放置后呈胶冻状，可能因为采集血液前动物刚刚采食或血液中脂肪含量过高等原因所致；采血量不足3mL甚至更少，分离出的血清量难以进行检测。
1.2 棉拭子采样中存在的问题
棉拭子一般采用2mL离心管保存，往往出现离心管中未加保存液、或离心管盖没扣紧保存液流失、禽流感、鸡新城疫监测采样未按规定采集咽喉和泄殖腔双拭子及保存不当等问题。
1.3 组织病料采集中常存在的问题
采集的组织病料没有代表性、病畜禽死亡过久采集的病料不新鲜、采集的病料已受污染、采集的病料体积过大、多个组织病料混在一起等。
1.4 采样记录不规范不完整
采样前准备不充分，不带采样登记表或采样登记表记录不规范、不完整，未按要求进行样品编号等。
2 样品采集应注意的事项
2.1 做好采样前的准备工作
根据采样目的，准备好采样所需的器械、采样记录用品、样品保存液、防護用品等。
2.2 血样采集应注意的事项
2.2.1 注意采血目的和用途
用于制备血清时，一般使用一次性不加抗凝剂的真空采血管，鸡血不好分离血清可采用加枸缘酸钠的采血管；用于制备血浆时，应使用加抗凝剂的采血管，采血后，来回摇动几次，以便使抗凝剂和血液充分混合。
2.2.2 掌握好采血时间和免疫间隔时间
用于免疫抗体检测的血样采集应注意各种疫苗免疫后抗体产生的时间，如高致病性禽流感、鸡新城疫、口蹄疫、猪瘟、小反刍兽疫等一般在免疫21d采血，高致病性猪蓝耳病在免疫28d后采血。采血前应提前通知养殖场（户）主，血液样品采集前动物一般禁食8h。
2.2.3 注意采集血样的方法
不同种类的动物采血方法不同。鸡采用心脏或翼下静脉采血；鸭一般采用跖内侧静脉采血；牛、羊一般采用颈静脉采血，奶牛、奶山羊可采用乳房静脉采血；猪一般采用耳静脉或前腔静脉采血。
2.2.4 注意样品的标记和采样记录的规范性
采血结束后，应立即在采血管上做好标记，在采样登记表上标明样品顺序号、采血管编号、畜禽标识号，必须一一对应。采样登记表上的其他内容也必须填写完整、规范，送样前采样登记表要复印1份自行留存备查。
2.3 采集棉拭子应注意的事项
高致病性禽流感、鸡新城疫、H7N9流感等监测采样应采集咽喉和泄殖腔双拭子，取无菌棉签，插入鸡喉头内或泄殖腔转动3圈取出，插入离心管中剪去露出部分，盖紧瓶盖，做好标记，密封低温保存；猪腔拭子、咽拭子、肛拭子采集用灭菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉、肛门的分泌物；羊小反刍兽疫应采集口鼻分泌物拭子。拭子应密封低温保存，其常用的保存液为含抗生素的PBS液或30%甘油盐水缓冲液。
2.4 采集组织病料应注意的事项
怀疑炭疽病的动物严禁剖检；采样时应从胸腔到腹腔，先采实质脏器后采腔肠器官，尽量做到无菌；采取的病料必须有代表性，采取的脏器组织应为病变明显部位；病料最好在使用治疗药物前采取，死亡动物的内脏病料采取，最迟不超过死后6h，否则尸体腐败，难以采到合格的病料。
2.5 样品的保存及送样应注意的事项
血液样品如不能现场分离血清，应冷藏保存，必须在48h内用冷藏箱送往实验室，血清低温保存；棉拭子、组织病料采集后应迅速用冷藏箱送往实验室检测，如不能立即检测，应低温保存。
参考文献
[1]乔丽.浅谈兽医实验室工作几点注意事项[J].中国畜牧兽医文摘，2016（12）.
关键词： 动物疫病；监测采样；问题；注意事项
中图分类号：S852.4 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20170932107
1 采集样品中存在的问题
1.1 采集血样中存在的问题
溶血，是实验室收取血样中最常出现的问题，是因放置不稳、倒置或送样中受到剧烈震荡、采血管受污染等原因所致；腐败变质，因未冷藏保存、未及时送到实验室引起；血清不析出，在牛、鸡血样品中易出现这种现象；呈胶冻状，血清分离放置后呈胶冻状，可能因为采集血液前动物刚刚采食或血液中脂肪含量过高等原因所致；采血量不足3mL甚至更少，分离出的血清量难以进行检测。
1.2 棉拭子采样中存在的问题
棉拭子一般采用2mL离心管保存，往往出现离心管中未加保存液、或离心管盖没扣紧保存液流失、禽流感、鸡新城疫监测采样未按规定采集咽喉和泄殖腔双拭子及保存不当等问题。
1.3 组织病料采集中常存在的问题
采集的组织病料没有代表性、病畜禽死亡过久采集的病料不新鲜、采集的病料已受污染、采集的病料体积过大、多个组织病料混在一起等。
1.4 采样记录不规范不完整
采样前准备不充分，不带采样登记表或采样登记表记录不规范、不完整，未按要求进行样品编号等。
2 样品采集应注意的事项
2.1 做好采样前的准备工作
根据采样目的，准备好采样所需的器械、采样记录用品、样品保存液、防護用品等。
2.2 血样采集应注意的事项
2.2.1 注意采血目的和用途
用于制备血清时，一般使用一次性不加抗凝剂的真空采血管，鸡血不好分离血清可采用加枸缘酸钠的采血管；用于制备血浆时，应使用加抗凝剂的采血管，采血后，来回摇动几次，以便使抗凝剂和血液充分混合。
2.2.2 掌握好采血时间和免疫间隔时间
用于免疫抗体检测的血样采集应注意各种疫苗免疫后抗体产生的时间，如高致病性禽流感、鸡新城疫、口蹄疫、猪瘟、小反刍兽疫等一般在免疫21d采血，高致病性猪蓝耳病在免疫28d后采血。采血前应提前通知养殖场（户）主，血液样品采集前动物一般禁食8h。
2.2.3 注意采集血样的方法
不同种类的动物采血方法不同。鸡采用心脏或翼下静脉采血；鸭一般采用跖内侧静脉采血；牛、羊一般采用颈静脉采血，奶牛、奶山羊可采用乳房静脉采血；猪一般采用耳静脉或前腔静脉采血。
2.2.4 注意样品的标记和采样记录的规范性
采血结束后，应立即在采血管上做好标记，在采样登记表上标明样品顺序号、采血管编号、畜禽标识号，必须一一对应。采样登记表上的其他内容也必须填写完整、规范，送样前采样登记表要复印1份自行留存备查。
2.3 采集棉拭子应注意的事项
高致病性禽流感、鸡新城疫、H7N9流感等监测采样应采集咽喉和泄殖腔双拭子，取无菌棉签，插入鸡喉头内或泄殖腔转动3圈取出，插入离心管中剪去露出部分，盖紧瓶盖，做好标记，密封低温保存；猪腔拭子、咽拭子、肛拭子采集用灭菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉、肛门的分泌物；羊小反刍兽疫应采集口鼻分泌物拭子。拭子应密封低温保存，其常用的保存液为含抗生素的PBS液或30%甘油盐水缓冲液。
2.4 采集组织病料应注意的事项
怀疑炭疽病的动物严禁剖检；采样时应从胸腔到腹腔，先采实质脏器后采腔肠器官，尽量做到无菌；采取的病料必须有代表性，采取的脏器组织应为病变明显部位；病料最好在使用治疗药物前采取，死亡动物的内脏病料采取，最迟不超过死后6h，否则尸体腐败，难以采到合格的病料。
2.5 样品的保存及送样应注意的事项
血液样品如不能现场分离血清，应冷藏保存，必须在48h内用冷藏箱送往实验室，血清低温保存；棉拭子、组织病料采集后应迅速用冷藏箱送往实验室检测，如不能立即检测，应低温保存。
参考文献
[1]乔丽.浅谈兽医实验室工作几点注意事项[J].中国畜牧兽医文摘，2016（12）.