【摘 要】
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目的检测树突细胞特异性捕获非整合素的细胞间黏附分子（DC-SIGN）转染的HEK293T细胞和单核细胞来源的树突细胞（MDDC）膜表面DC-SIGN受体对转谷氨酰胺酶3（TG3）的识别和摄取能力。方法采用脂质体转染的方法将融合有DC-SIGN基因片段及真核表达载体pGCMV-EGFP（增强绿色荧光蛋白）的质粒转染至HEK293T细胞，制备DC-SIGN-EGFP-HEK293T细胞；通过磁珠阴性分
【机 构】
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210042 南京，中国医学科学院 北京协和医学院皮肤病医院过敏及风湿免疫科（现在福建医科大学附属第一医院皮肤科，350004 福州）,210042 南京，中国医学科学院 北京协和医学院皮肤病医院过敏
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目的检测树突细胞特异性捕获非整合素的细胞间黏附分子（DC-SIGN）转染的HEK293T细胞和单核细胞来源的树突细胞（MDDC）膜表面DC-SIGN受体对转谷氨酰胺酶3（TG3）的识别和摄取能力。
方法采用脂质体转染的方法将融合有DC-SIGN基因片段及真核表达载体pGCMV-EGFP（增强绿色荧光蛋白）的质粒转染至HEK293T细胞，制备DC-SIGN-EGFP-HEK293T细胞；通过磁珠阴性分选出外周血中CD14+单核细胞，并通过粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4诱导获得MDDC。利用激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测转染的HEK293T细胞及MDDC上DC-SIGN受体对TG3蛋白的识别和摄取，并设立空白对照组（不加入Alexa Fluor-647染料标记的TG3）和阴性对照组（仅加入Alexa Fluor-647染料）。
结果TG3与HEK293T和MDDC细胞孵育3 h后，激光共聚焦显微镜及流式细胞仪均显示，TG3可以被HEK293T及MDDC细胞上DC-SIGN受体识别并结合摄取入细胞内，流式细胞仪检测显示TG3与MDDC的结合可被DC-SIGN阻断抗体部分阻断。阴性对照组和空白对照组未见HEK393T或MDDC细胞对TG3的识别和结合。
结论TG3可以作为一种自身抗原被DC-SIGN受体识别、结合，并被介导摄取进入树突细胞。
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