【摘 要】
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目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对人近端肾小管上皮细胞系HK-2中结缔组织生长因子(CTGF)基因启动子活性的调控作用,以及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)途径对该生长因子作用的影响.方法构建含有人类CTGF基因启动子的报告基因pCTGF-luc,将其瞬时转染HK-2细胞.通过检测荧光素酶的活性观察TGF-β1和MAPK途径抑制剂对CTGF基因启动子活性的影响.结果TGF-β1以剂量和时间
【机 构】
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200025,上海第二医科大学附属瑞金医院肾脏科,200025,上海第二医科大学附属瑞金医院肾脏科,200025,上海第二医科大学附属瑞金医院肾脏科,上海第二医科大学生化教研室
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目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对人近端肾小管上皮细胞系HK-2中结缔组织生长因子(CTGF)基因启动子活性的调控作用,以及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)途径对该生长因子作用的影响.方法构建含有人类CTGF基因启动子的报告基因pCTGF-luc,将其瞬时转染HK-2细胞.通过检测荧光素酶的活性观察TGF-β1和MAPK途径抑制剂对CTGF基因启动子活性的影响.结果TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子的活性.最佳刺激浓度是5 ng/ml,最佳刺激时间为12 h,荧光素酶相对活性分别为对照组的1.82倍和2.10倍(P＜0.05).应用PD98059、SB203580和SP600125分别特异性抑制MAPK途径的胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、蛋白激酶p38(p38MAPK)和c-Jun-氨基末端激酶(JNK)通路,对TGF-β1上调CTGF启动子活性的作用有不同影响.PD98059显著增加HK-2中pCTGF-luc的基础活性,并在一定浓度范围内(0.5～10 μmol/L)促进TGF-β1的上调作用.SB203580对pCTGF-luc基础活性无影响,但以剂量依赖方式显著抑制TGF-β1的激活效应.而SP600125对基础状态和TGF-β1刺激下CTGF基因启动子活性无影响.结论TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子活性,在转录水平调节CTGF表达.MAPK途径的ERK和p38MAPK通路可影响TGF-β1的这一调控作用。
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