烟草蚀纹病毒外壳蛋白基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

来源 :中国烟草学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：toforworld

【摘要】

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利用RT-PCR方法获得烟草蚀纹病毒（TEv）外壳蛋白（cP）基因，大小为789bp。经过EcoRI和NotI双酶切、定向克隆到pPIC9K，构建了真核表达载体pPIC9K．TEVCP。将重组质粒用sal I线性化后电转

【作者】

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王秀敏吴云锋韩烈保

【机构】

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北京林业大学草坪研究所,西北农林科技大学分子植物病毒研究室

【出处】

：

中国烟草学报

【发表日期】

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2009年1期

【关键词】

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烟草蚀纹病毒外壳蛋白毕赤酵母:表达 tobacco etch virus coat protein Pichia pastoris expres

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利用RT-PCR方法获得烟草蚀纹病毒（TEv）外壳蛋白（cP）基因，大小为789bp。经过EcoRI和NotI双酶切、定向克隆到pPIC9K，构建了真核表达载体pPIC9K．TEVCP。将重组质粒用sal I线性化后电转化导入毕赤酵母GS115中，经PCR鉴定为阳性的菌落，利用甲醇进行诱导表达，筛选出了高效表达菌株GS115-11和GS115-14，表达的蛋白大小约为37kD。表达产物经SDS．PAGE割胶纯化后，免疫家兔，制备了特异性抗血清，ELISA法检测效价为1：1500。Westernblot结果

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