【摘 要】
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目的 构建人乳头状瘤病毒18型(HPV-18)特异性HLA-A2肽五聚体,为HPV-18型抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的检测提供直接、有效的方法,并将其初步应用于宫颈癌患者外周血中
【机 构】
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温州医学院皮肤性病学研究所,温州医学院妇产科,第三军医大学全军免疫学研究所,重庆工学院生物工程学院
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目的 构建人乳头状瘤病毒18型(HPV-18)特异性HLA-A2肽五聚体,为HPV-18型抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的检测提供直接、有效的方法,并将其初步应用于宫颈癌患者外周血中抗原特异性CTL的检测.方法 构建含有HLA-A2-BSP和β2M基因的原核表达载体,并进行表达、复性、鉴定及纯化.再将特异性短肽与HLA-A2-BSP和β2M在体外进行耦合,该复合物经纯化浓缩后进行生物素化.生物素化的产物经纯化浓缩后形成单体,此单体再与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成五聚体.运用所构建的五聚体,通过流式细胞仪检测宫颈癌患者外周血中抗原特异性CTL,并与正常对照组进行比较分析.结果 所构建的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β2M原核表达载体的表达高效而且稳定,纯度达90%以上.HPV-18阳性宫颈癌患者体内抗原特异性CTL计数明显高于对照组(P＜0.05).结论 在五聚体复合物的构建中,高效、稳定的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β2M原核表达载体是构建成功的基础.所构建的MHC Ⅰ类分子五聚体和传统的四聚体相比,作为体内、外HPV-18E7抗原特异性CTL检测的有效工具,具有一定优势.
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