【摘 要】
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目的 采用E.coli表达系统分别表达心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)和cTnC,制备cTnⅠ-cTnC二元复合蛋白,并验证其抗原性能.方法 将合成的cTnⅠ和cTnC基因片段分别
【机 构】
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美康生物科技股份有限公司,浙江宁波,315104
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目的 采用E.coli表达系统分别表达心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)和cTnC,制备cTnⅠ-cTnC二元复合蛋白,并验证其抗原性能.方法 将合成的cTnⅠ和cTnC基因片段分别插入pET-22b和pET-28a原核表达载体,构建重组表达质粒,并分别转化E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.将表达的cTnⅠ和cTnC蛋白经Ni2+螯合亲和层析和离子交换层析两步纯化后,在Ca2+存在的条件下按摩尔比1∶1混合,制备cTnⅠ-cTnC二元复合蛋白.采用双抗夹心ELISA法检测复合蛋白的抗原反应性;将cTnⅠ单体和cTnⅠ-cTnC复合蛋白稀释后,均分别于4和37 ℃条件下放置14 d,检测cTnⅠ抗原放置前后的浓度变化,验证其储存稳定性.结果 纯化的cTnⅠ和cTnC重组蛋白的SDS-PAGE纯度均达90％以上.与对照抗原(8IC63二元复合抗原)比较,cTnⅠ-cTnC复合蛋白与抗体反应信号较强,且能够同时被cTnⅠ和cTnC抗体识别;经37 ℃热加速试验后,cTnⅠ单体蛋白浓度降低约80％,而cTnⅠ-cTnC复合蛋白的浓度变化幅度在±15％间.结论 制备的cTnⅠ-cTnC二元复合蛋白具有良好的抗原反应性和储存稳定性,为下一步制备反应性良好和储存稳定的cTnⅠ检测质控校准品提供了可靠的原料.
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