【摘 要】
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目的:探索建立乳腺瞬时性表达系统,用于快速检测所构建的乳腺表达载体的有效性,为进行转基因动物实验奠定基础.方法:DNA常规操作;孕小鼠乳腺注射;纤维蛋白琼脂糖平板法检测Mu
【机 构】
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军事医学科学院生物工程研究所,北京师范大学生命科学学院
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目的:探索建立乳腺瞬时性表达系统,用于快速检测所构建的乳腺表达载体的有效性,为进行转基因动物实验奠定基础.方法:DNA常规操作;孕小鼠乳腺注射;纤维蛋白琼脂糖平板法检测Mut-PA.结果:构建了含有Mut-PA基因的乳腺表达载体pB3mt-PA,将此载体直接注射到孕小鼠乳腺中进行暂时性表达,产仔后第4天采乳汁,用纤维蛋白琼脂糖平板法检测t-PA的活性,表达活性可达20～40 U/ml,其活性能被天然的t-PA多克隆抗体所中和,表达持续期8 d.结论:所克隆的牛BLG基因-705 bp的5′端调控序列包含了必需的调控元件,并具有调控外源基因的表达的功能,克隆的3′端序列是适合的.构建的表达载体可用于制备转基因动物.
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