pNTAP-MK2真核表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立

来源 :南方医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：cs80085829

【摘要】

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目的构建pNTAP-MK2真核表达质粒,并建立其稳定表达的HEK293细胞系。方法将MK2亚克隆至串联亲和纯化载体pNTAP质粒上,构建成重组质粒pNTAP-MK2,转化该重组质粒至感受态大肠杆

【作者】

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王达安龚小卫刘爱华梅柱中王丹明小燕王旭魏洁邓

【机构】

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南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室,暨南大学医学院病理生理学系,南方医科大学南方医院呼吸科

【出处】

：

南方医科大学学报

【发表日期】

：

2010年10期

【关键词】

：

MAPK激活蛋白激酶2 pNTAP 真核表达载体分子克隆基因表达 MAP kinase-activated protein kinase 2 pNTAP e

【基金项目】

：

基金项目：长江学者和创新团队发展计划项目（IRT0731）,国家自然科学基金委员会一广东省人民政府自然科学联合基金重点项目（U0632004）,国家自然科学基金（30670828,30572151,30700291）,高等学校博士学科点专项科研基金（20069981001）

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目的构建pNTAP-MK2真核表达质粒,并建立其稳定表达的HEK293细胞系。方法将MK2亚克隆至串联亲和纯化载体pNTAP质粒上,构建成重组质粒pNTAP-MK2,转化该重组质粒至感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用脂质体PolyFect介导将其转染至HEK293细胞中,再通过G418筛选建立稳定表达TAPtag-MK2融合蛋白的HEK293细胞系;利用Western blotting和细胞免疫荧光标记法检测融合蛋白TAPtag-MK2的表达及细胞内定位情况。结果

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