S腺苷蛋氨酸对肝癌细胞中GADD45β基因的表达诱导及其机制研究

来源 :中华肝胆外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gongwj123
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目的 初步明确肝癌细胞中特异性表达缺失的GADD45β基因近端启动子活性调控中心,并探讨S腺苷蛋氨酸对肝癌细胞HepG2中GADD45β表达的影响及可能机制.方法 以30~50个碱基的间隔,于体外人工合成GADD45β近端启动子序列(-618~-520),分别插入pGL3 basic荧光素表达质粒的荧光基因上游,以电穿孔法转染HepG2,根据启动子活性强度结合TRANSFAC数据库,分析可能存在的转录调节因子结合位点;实时荧光定量PCR比较S腺苷蛋氨酸作用前后HepG2细胞GADD45β表达,并在此基础上进一步比较S腺苷蛋氨酸对GADD45β启动子活性的诱导作用,探讨其可能作用机制,并为GADD45β近端启动子研究提供功能性证据.结果 GADD45β近端启动子中含有3个NF-kB转录调节因子与启动子结合位点(-602/-593、-581/-572、-537/-528);S腺苷蛋氨酸能明显诱导HepG2中GADD45β的表达,并呈现出剂量一效应的正相关关系,同时其能相应明显诱导NF-kB的启动子活性.结论 S腺苷蛋氨酸能明显诱导肝癌细胞中特异性缺失的GADD45β基因表达,增强转录调节因子NF-kB的活性水平是其可能的作用机制,该研究为S腺苷蛋氨酸的肝脏保护作用提供了新的实验依据。

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