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采用液相色谱-串联质谱法测定畜禽肉中维生素D3和25-OH-D3的含量。样品经过皂化,固相萃取净化,正相制备后,Symmetry C18色谱柱分离,采用大气压化学电离源多反应监测模式检测。氘代维生素D3作为内标物。维生素D3和25-OH-D3的线性范围均为5~100μg·L-1,检出限（3S/N）均为0.60μg·kg-1。方法用于猪肉样品的分析,加标回收率在75.0%~97.1%之间,测定值的相对标准偏差（n=6）在1.9%~5.6%之间。