【摘 要】
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目的 探讨2种分别携带神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)反义RNA重组腺相关病毒载体(rAAV-AsnNOS和rAAV-AsiNOS)提高PC12细胞耐氧能力和抑制PC12细胞凋
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目的 探讨2种分别携带神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)反义RNA重组腺相关病毒载体(rAAV-AsnNOS和rAAV-AsiNOS)提高PC12细胞耐氧能力和抑制PC12细胞凋亡的作用机制.方法 将PC12细胞培养基换成分别含有rAAV-AsnNOS、rAAV-Asi-NOS和rAAV-LacZ(携带β-半乳糖苷酶的结构基因重组腺相关病毒载体)的10%胎牛血清DMEM,设立对照组,测定不同rAAV转染后PC12细胞在不同缺氧时间下细胞生长趋势和乳酸脱氢酶(LDH)活性改变,流式细胞仪(FCM)测定细胞凋亡率,FCM和半定量RT-PCR分别分析nNOS、iN-OS、p38MAPK和Caspase-3阳性细胞百分比和mRNA的表达.结果 一定感染复数的rAAV对PC12细胞生长趋势无明显影响;转染rAAV-AsnNOS的PC12细胞在缺氧1～6 h时LDH活性、细胞凋亡率以及nNOS、p38MAPK和Caspase-3阳性细胞百分比和mRNA表达量均较对照组、rAAV-LacZ组和rAAV-AsiNOS组均降低;转染rAAV-AsiNOS的PC12细胞在缺氧6～24 h时LDH活性、细胞凋亡率以及iNOS、p38MAPK和Caspase-3阳性细胞百分比和mRNA表达量也均较对照组、rAAV-LacZ组和rAAV-AsnNOS组降低.结论 在体外神经细胞缺氧模型中,转染后PC12细胞能够耐受缺氧损伤;转染rAAV-AsnNOS病毒载体的PC12细胞能够在缺氧早期抑制nNOS、p38MAPK和Caspase-3的表达,转染rAAV-AsiNOS病毒载体的PC12细胞能够在缺氧晚期抑制iNOS、p38MAPK和Caspase-3的表达.
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