根据碱裂解提取大肠杆菌质粒的原理与程序,借鉴Anderson和O’Sullivan的乳酸菌质粒提取方法,使酶解破壁和碱破膜变性相结合,通过优化乳酸菌质粒提取中酶浓度、酶解时间、质粒沉淀条件,提出1种高效提取乳酸菌质粒的方法。在此基础上,分析并检验该方法提取乳酸菌质粒的适用性、效率和质粒质量。结果表明:采用该方法可提取乳球菌及乳杆菌中的质粒,所提取的乳酸菌质粒不受质粒大小及拷贝数高低的影响,乳酸菌质粒的检出率和提取的成功率显著提高;提取的乳酸菌质粒达到DNA纯化后的水平,可用于酶切等分子生物学操作。操作实践表明:该方法适合乳酸菌质粒的小量提取(1.5~2 mL菌液)到中量提取(10 mL菌液);其操作周期与大肠杆菌质粒提取检测彼此相当,而比Anderson和O’Sullivan提取检测乳酸菌质粒缩短3~4 h。本文还就乳酸菌质粒提取中的主要原理及注意事项进行探讨,以期为进一步开发乳酸菌质粒分离纯化试剂盒提供理论依据。