【摘 要】
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目的构建含B7-1 基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因的融合表达载体,转染LM8骨肉瘤细胞制备骨肉瘤疫苗.方法用RT-PCR法扩增B7-1基因片断,应用含GFP基因的真核表达质粒构建融合表达
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院,华中科技大学同济医学院附属协和医院
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目的构建含B7-1 基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因的融合表达载体,转染LM8骨肉瘤细胞制备骨肉瘤疫苗.方法用RT-PCR法扩增B7-1基因片断,应用含GFP基因的真核表达质粒构建融合表达载体,酶切、测序鉴定构建质粒;采用脂质体介导方法将其转染到LM8细胞,并用荧光显微镜及LCM结合蛋白免疫印记检测其在肿瘤疫苗细胞中的表达.结果经PCR 及酶切鉴定,证实成功构建了含B7-1基因的真核表达重组体pEGFP-C1/B7,重组子测序结果与国际基因文库中mB7-1序列相符.用荧光显微镜观察到疫苗细胞中有GFP表达
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