β分泌酶抑制剂体外筛选模型的构建与验证

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目的 构建β分泌酶抑制剂筛选模型用于治疗阿尔采末病药物筛选。方法 克隆人β分泌酶基因,并在大肠杆菌中表达,经纯化、复性后获得重组蛋白.以重组β淀粉样肽融合蛋白为底物,体外建立酶学反应。酶切反应液用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,或将其包被金属螫和酶标板,用抗β淀粉样肽抗体行ELISA检测。结果 用RT-PCR法克隆了人β分泌酶基因,构建人表达载体,诱导表达后获得高效表达。建立体外酶学反应,用ELISA和SDS-PAGE检测,二者检测结果一致,且用所构建方法测得阳性抑制剂的IC50值与文献报道吻合。对77种用于老年
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