【摘 要】
：
食源微生物是影响食品质量与安全的重要因素,微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)能够对核酸进行绝对定量检测,在食源性致病菌检测中具有越来越重要的地位.为实现食源性致病菌基因组拷贝数的快速绝对定量检测,本研究从已报道的伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)及单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)检测引物和探针中,经TaqMan探针法qPCR特异性验证,筛选获得以ttrA/tt
【机 构】
：
广州市食品检验所,广州511406;广东省食品检验所,广州510407
论文部分内容阅读
食源微生物是影响食品质量与安全的重要因素,微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)能够对核酸进行绝对定量检测,在食源性致病菌检测中具有越来越重要的地位.为实现食源性致病菌基因组拷贝数的快速绝对定量检测,本研究从已报道的伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)及单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)检测引物和探针中,经TaqMan探针法qPCR特异性验证,筛选获得以ttrA/ttrC、FMN-binding glutamate synthase、invasion associated endopeptidase基因为靶标的引物和探针,并将伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌检测探针连接6-羧基荧光素(6-carboxy-fluorescein,FAM)基团、单核细胞增生李斯特氏菌检测探针连接六氯-6-甲基荧光素(hexachloro fluorescein,HEX)基团,分别构建3种目标菌株的单重ddPCR检测体系.在此基础上,通过引物和探针浓度和退火温度的优化构建可在同一反应体系中同时、快速、绝对定量检测伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特氏菌基因组拷贝数的多重ddPCR检测体系.多重ddPCR检测体系可扩增获得8(23)个微滴簇区域,对伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌定量检测的线性范围分别为235～0.23、284～0.18、380～0.42 copies/μL;在定量检测范围内的线性相关系数R2均大于0.999,且重复性较好,3种致病菌的多重ddPCR检测体系与单种菌的单重ddPCR定量线性范围几乎一致.本研究构建的多重ddPCR检测体系特异性强、稳定性好、定量范围广,可为食源性致病菌的无增菌绝对定量检测提供技术支持.
其他文献
睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)是影响肌肉发育的重要候选基因,可以编码具有多种生物学功能的细胞因子.本研究旨在探讨绵羊(Ovis aries)CNTF基因的组织表达规律,扫描其SNPs并在大规模群体中与生长性状进行关联分析.本研究以1399只系谱清晰、表型记录准确的湖羊(Ovis aries)群体为研究对象,利用qPCR技术检测了绵羊睫状神经营养因子基因在湖羊10个组织的表达量,采用混合池测序的方法扫描该基因SNPs,并与生长性状进行关联分析.研究结果发
本文简述了对分课堂教学模式的应用背景,并从教学准备阶段、模式实施阶段、成果表现阶段三个角度,具体分析了对分课堂教学模式的具体应用过程,希望能够为教育行业工作者提供一些帮助.
生物钟基因是控制昼夜节律的关键基因.光照是对生物钟影响最大的环境变量,光照周期的改变会导致生物钟基因表达模式变化,进一步影响生物的生活习性和发育繁殖等多项生理活动.为探究不同光照周期对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)生物钟基因昼夜节律的影响,本研究共设置3种光照周期条件,光(L)暗(D)比分别为8 h光照和16 h黑暗(8L:16D)、12 h光照和12 h黑暗(12L:12D)及16 h光照和8 h黑暗(16L:8D),光照强度1000 lx,光起始时间设定为计时器时间(zeit
钙依赖蛋白激酶(calcium-dependent protein kinase,CDPK)是植物特有的一类丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶,在植物生长发育和逆境信号转导过程中具有十分重要的作用.为了探讨CDPK在薄壳山核桃(Carya illinoinensis)和山核桃(Carya cathayensis)生长发育过程中的作用,本研究利用生物信息学手段从薄壳山核桃和山核桃基因组中鉴定CDPK基因家族,利用MEGA7.0软件进行多序列比对和系统进化树构建,并进行基因结构和保守基序分析.结果显示,本研究成功鉴定了
瘤胃是反刍动物重要的消化器官,早期补饲开食料可以满足羔羊(Ovis aries)快速生长的营养需要,并促进瘤胃早期发育.本研究通过研究羔羊补饲开食料对瘤胃组织基因表达的影响,旨在阐明开食料对瘤胃发育的作用机理.选取健康的7日龄湖羊公羔22只,随机分为对照组与补饲组,对照组饲喂代乳粉,补饲组在饲喂代乳粉的基础上补饲开食料.28日龄屠宰,采集瘤胃腹囊组织,进行转录组测序分析.结果显示:对照组与补饲组分别获得61.70和58.95 Gb的有效数据,与参考基因组的比对效率在87.85％～89.45％;与对照组相比
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)具有多重耐药特性,生物被膜的形成是其重要的耐药机制之一.甘草甜素(glycyrrhizin,GLY)具有抗菌功效.为了探讨GLY对多重耐药铜绿假单胞菌临床分离株的抗菌活性及生物膜形成的作用效果,本研究从角膜炎病兔(浙江嵊州\'白中王\'长毛兔)(Leporidae angora)眼分泌物中分离获得铜绿假单胞菌G1株(GenBank No.MZ683158)和G2株(GenBank No.MZ683159),进一步采用微量稀释法测定GLY对
受酸性矿山废水(acid mine drainage,AMD)污染农田土壤性质变化较大,对微生物生长有潜在危害.为探究含砷AMD对稻田土壤微生物群落结构的影响,本研究通过采集贵州省兴仁市高砷煤矿区砷污染稻田(污染区)和未污染稻田(清洁区)土壤,测定上覆水及土壤的理化性质,利用高通量测序技术分析污染区与清洁区的微生物群落组成和多样性.结果表明,污染区土壤酸化,pH介于3.60～4.40,铁(Fe)和砷(As)的平均含量分别为114.26 g/kg和98.70 mg/kg,而清洁区土壤pH平均为5.93,Fe
脱水素(dehydrin,DHN)属于胚胎发育晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant protein,LEA)Ⅱ家族成员,通常在植物受到逆境胁迫时产生并积累,以提高植物对逆境的耐受性,在植物抵抗逆境过程中发挥重要作用.本文综述了脱水素的蛋白结构特征,以及在低温、干旱、盐胁迫等非生物胁迫下的功能,以期为脱水素的深入研究提供参考依据,同时展望了利用现代生物技术将脱水素用于提高植物对逆境耐受力的应用前景.此综述归纳脱水素的功能,探讨脱水素的作用机理,解析脱水素的分子调控机制,对培育
甘蔗(Saccharum spp.complex)是禾本科的主要物种和重要经济作物,对世界农业经济发展和保障供应食糖发挥重要作用.一方面,甘蔗具有较好的抗、耐逆性,但其生产和生产力依然被多种生物和非生物逆境所制约.另一方面,商业栽培种在生产上一般不开花,即便开花种子基本也是败育的,加上甘蔗产品蔗糖为碳水化合物,不含蛋白成分,因此,甘蔗属于转基因安全风险等级最低(I级)的作物之一.再则,甘蔗为无性繁殖作物,优异的转基因单株可通过组织培养快速扩大群体.鉴于此,基因工程成为甘蔗弥补传统杂交育种性状缺陷和加快遗传
R2R3-MYB转录因子是植物最大的转录因子家族之一,广泛参与了植物的次生代谢调控过程.为探究番红花(Crocus sativus)中R2R3-MYB转录因子的时空表达特征并筛选与番红花次生代谢相关的CsR2R3-MYB转录因子,本研究以其全长转录组测序数据为基础,利用生物信息学方法对CsR2R3-MYB转录因子进行鉴定和系统分析,并用qRT-PCR对其时空表达模式进行探讨.从番红花转录组中筛选出42个R2R3-MYB转录因子,理化性质分析结果显示均为不稳定亲水性蛋白,亚细胞定位预测结果显示大部分在细胞核