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目的 研究建立细胞外丙型肝炎病毒聚合酶复制模型使用的生物素标记UTP浓度及温度值，为筛选药物创造条件。方法 使用高保真PfuDNA聚合酶进行反转录及套式PCR，从我国HCV RNA阳性病人血清中扩增出HCV NS5b RNA聚合酶全长基因序列，构建原核表达载体pET-30a-NS5b。在多个载体中选取pET-30a作为表达载体，选择诱导表达条件。利用Ni^2+金属离子螯和亲和层析将其纯化，对该酶蛋白的变性和复性条件进行研究。利用96孔DNA-BAND培养板，建立生物素标记检测HCV NS5b聚合酶活性的模