不同来源的5株新城疫病毒的分离·鉴定与基因型分析

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[目的]分离鉴定不同来源的5株新城疫病毒(NDV),并对其基因型进行分析.[方法]从江苏和广西发病孔雀、鸡、鹅群分离到5株NDV.参照文献合成1对引物P1和P2,用于扩增基质蛋白基因(M)1 161 nt至融合蛋白基因(F)889 nt之间长约970 nt的片段.用Trizol RNA试剂盒抽提5株NDV基因组,再按照Promega说明书,用上游引物P1合成F基因cDNA,合成的cDNA作为聚合酶链式反应(PCR)的扩增模板,用PCR反应扩增F 基因目的片段.将所得产物进行序列测定,获得这5株NDV F基因5′端约890 nt序列.采用DNAMAN软件对F基因47~420 nt间的片段进行序列分析,并推导出相应的氨基酸序列.在此基础上,从GenBank中选取32个参考毒株与这5个分离株进行遗传变异分析,并绘制系统发育进化树.[结果]同源性分析比较表明,5株NDV分离株之间的差异性很小,它们之间的同源性为95.00%~97.00%,其中2株广西分离株之间的同源性为97.07%,3株鹅源分离株之间的同源性为96.43%.所有毒株F蛋白裂解区氨基酸序列均为112R-R-Q-K-R-F117,符合强毒株裂解区位点特征.这5株NDV分离株均属于基因Ⅶ型和Ⅶd亚型.[结论]近几年流行的NDV的主导基因型为基因Ⅶ型,且来自不同宿主的毒株之间的差异性较小.
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